[发明专利]一种北平顶猴T细胞的体外扩增方法

说明书

本发明公开了一种北平顶猴T细胞的体外扩增方法，属于生物技术领域，本发明利用已商品化的非人灵长类动物T细胞激活/扩增试剂盒进行北平顶猴T细胞的体外扩增，该试剂盒包含磁珠、生物素化抗体，可模拟体内抗原提呈细胞的作用，提供T细胞活化的第一信号、第二信号，有效激活和纯化外周血单核细胞中的静息T细胞。CD3分子是T细胞表面的重要标志，其与TCR以非共价键结合形成TCR‑CD3复合体，向胞内传递活化信号，诱导T细胞活化与增值。CD28介导的共刺激信号可以诱导T细胞的分化、增殖和IL‑2等细胞因子的分泌。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种北平顶猴T细胞的体外扩增方法。

背景技术

艾滋病即获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)是由I型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type I，HIV-1)引起的传染性疾病。HIV-1病毒主要损害机体免疫系统，严重威胁人类的生命健康。长期以来，为了攻克HIV-1病毒感染，研究者做了许多努力。非人灵长类动物(non-human primates，NHP)模型是研究艾滋病发病机制、疫苗、药物的较理想的动物模型。前期研究中，猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus，SIV)或猴/人免疫缺陷嵌合病毒(simian/humanimmunodeficiency virus，SHIV)感染灵长类动物替代模型是应用最广泛的HIV/AIDS动物模型。但SIV及SHIV病毒与HIV-1病毒基因同源性差异较大，不能真实反映临床上机体感染HIV-1后的免疫反应情况。研究者发现平顶猴(pig-tailed macaque，M.nemestrina)可直接感染HIV-1，对艾滋病的治疗、药物及疫苗研发具有重要意义。目前，根据地域分布和形态学特征，平顶猴可分为南平顶猴(Sunda pig-tailed macaque，M.nemestrina)、北平顶猴(Northern pig-tailed macaque，M.leonina)和明打威猴(Mentawai macaque，M.pagensis)。中国境内分布的平顶猴为北平顶猴。2017年，中国科学家首次创建了HIV-1感染北平顶猴艾滋病模型，感染后出现艾滋病样症状。HIV-1感染北平顶猴后，在急性感染期出现病毒血症，且呈低水平持续性复制和形成潜伏感染，为研究HIV-1感染的发病机制及疫苗提供了可能。

北平顶猴在中国为国家一级保护动物，仅分布于我国云南南部和西藏东南部。北平顶猴在中国境内数量较少。为了获得足够数量有功能的北平顶猴T淋巴细胞，用于艾滋病机理、临床研究和药物研究，本发明利用已经商品化的非人灵长类动物T细胞激活/扩增试剂盒，优化细胞激活、扩增流程，提高T淋巴细胞的体外扩增效率。

目前，非人灵长类动物T细胞激活/扩增试剂盒已广泛用于激活和扩增恒河猴T淋巴细胞。该试剂盒操作简便，快捷，对后续实验无影响，应用广泛。试剂盒内包含磁珠(Anti-Biotin MACSiBead^TM Particles,cell culture grade)，生物素化抗体(CD2-Biotin,human/CD3-Biotin,non-human primate/CD28-Biotin,human)。磁珠表面可偶联生物素化抗体，模拟体内抗原提呈细胞-T细胞相互作用，有效激活和纯化外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMCs)中的静息T细胞。而T细胞的扩增是通过培养和二次激活来实现的。对于北平顶猴T淋巴细胞，试剂盒的扩增效率较低。

发明内容

本发明的目的是提供一种北平顶猴T细胞的体外扩增方法，以解决上述现有技术存在的问题。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：