[发明专利]脐带间充质干细胞无血清培养基及其制备方法

说明书

本发明涉及干细胞培养技术领域，涉及一种脐带间充质干细胞无血清培养基及其制备方法，包括DMEM低糖培养基，还包括人血清白蛋白、转铁蛋白、表皮细胞生长因子、转化生长因子、胰岛素、橄榄油、丹参素钠和银杏酸。本发明制备的培养基可显著提高脐带间充质干细胞的增殖数量和增殖率，并且脐带间充质干细胞不易分化产生表型改变，较好的保护脐带间充质干细胞，并且脐带间充质干细胞贴壁的效果佳，成本较低，易于工艺化生产。

技术领域

本发明涉及干细胞培养技术领域，尤其是涉及一种脐带间充质干细胞无血清培养基及其制备方法。

背景技术

脐带间充质干细胞指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，应用人脐带血清为主体的培养体系可成功扩增人脐带间充质干细胞，人脐带间充质干细胞的生长有赖于血清的存在，如胎牛血清或新生牛血清，在不添加血清的培养基中，绝大部分细胞(包括干细胞)均不能生长增殖或分化，血清能够提供多种许多细胞(包括干细胞)生长必须的营养物质，如胰岛素、肾上腺皮质激素、类固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等，还提供携带各种重要的低分子量物质的结合蛋白，如白蛋白携带维生素、脂肪以及激素等，转铁蛋白携带铁等。

血清是一种非常复杂的混合物，成分可能多达几百种，目前对其准确的成分、含量及其作用机制仍不清楚，血清各批次之间的质量差别较大，受到生产商原料来源地的影响较大，要保证每批的一致性很困难，不利于实验室研究或产品生产的标准化，血清中可能含有一些未知的或未检测出的支原体、病毒等有害微生物，对细胞产生潜在的影响，并且血清中存在的一些抗体、补体及细菌毒素等物质，也对细胞的生长产生不利影响，甚至造成细胞的死亡。

但是干细胞的临床应用要求用无血清培养基培养，目前市场上的无血清培养基的培养效果远远不如血清培养基，中国专利申请CN105420182A公开了一种无血清的脐带间充质干细胞培养基，包括DMEM培养基、碱性成纤维生长因子、表皮生长因子、胰岛素、白血病抑制因子、胰蛋白酶、2-巯基乙醇、亚硒酸钠和纤连蛋白等，通过添加较高含量的纤连蛋白实现较好的贴壁性能，但是细胞的增殖速率较慢；中国专利申请CN102634482A公开了一种间充质干细胞的无血清完全培养基，由基础培养基和添加成分构成，所述的基础培养基为DMEM/F12，所述的添加成分由重组胰岛素、人血清白蛋白、人转铁蛋白、胆固醇、亚硒酸钠、硝酸铁和葡聚糖组成，不含有血清，避免了含血清培养基的血清批次间不稳定、有细胞毒性和大量异源蛋白等缺陷，但是培养出来的干细胞易于分化从而发生表型改变，还有些市场上市售的脐带间充质干细胞无血清培养基存在价格昂贵、贴壁性能不理想等缺点。

因此，亟需一种脐带间充质干细胞增殖速率快、不易分化、成本低和易于工业化的脐带间充质干细胞无血清培养基及其制备方法。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的之一是提供一种脐带间充质干细胞无血清培养基，通过添加丹参素钠和银杏酸，可显著提高脐带间充质干细胞的增殖速率，并且脐带间充质干细胞不易分化产生表型改变，较好的保护脐带间充质干细胞，其中还添加了橄榄油增强贴壁的效果，成本较低，且易于工艺化生产。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种脐带间充质干细胞无血清培养基，包括DMEM低糖培养基，还包括人血清白蛋白、转铁蛋白、表皮细胞生长因子、转化生长因子、胰岛素、橄榄油、丹参素钠和银杏酸。

优选地，所述人血清白蛋白的浓度为1～5mg/mL，所述转铁蛋白的浓度为20～50mg/mL，所述表皮细胞生长因子的浓度为10～30ng/mL，所述转化生长因子的浓度为20～40ng/mL，所述胰岛素的浓度为15～25μg/mL，所述橄榄油的浓度为1～5mg/mL，所述丹参素钠的浓度为10～30μg/mL和银杏酸的浓度为5～15μg/mL。