[发明专利]ASGR1突变基因及其在制备哺乳动物肝损伤敏感模型中的应用

说明书

本申请属于基因工程技术领域，公开了一种基因工程编辑位点以及获得的ASGR1突变基因在制备哺乳动物肝损伤敏感模型中的应用。通过对ASGR1基因序列中合适的编辑位点进行基因编辑，获得了传代稳定、易于诱导肝损伤的动物模型，并建立了稳定的繁育群体。本发明建立了一种获得传代稳定、易于诱导肝损伤的基因工程非人哺乳动物模型群体的方法，满足各种的实验需求。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及ASGR1突变基因及其在制备哺乳动物肝损伤敏感模型中的应用。

背景技术

动物疾病模型是是指各种医学科学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物。主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学(包括新药筛选)研究。人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的发展来之缓慢，临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性，而且许多实验在实验动物伦理和方法上也受到限制。而借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。

肝损伤是各种肝脏疾病的病变结果，对肝损伤的防治目前仍是一个严峻的课题。通过建立实验性肝损伤动物模型，研究肝病的发生机制，筛选保肝药物，探索保肝作用原理，具有重要的现实意义。肝损伤模型按成因可分为酒精肝损伤、药物性肝损伤、病毒性肝损伤。

现有的制备技术主要有三类：

1)外科手术制备。通过手术的方式，切除部分器官，造成器官损伤。由于动物个体间差异难以做到表型完全一致、手术操作及护理等问题限制了其应用。

2)药物诱导。通过激素、化学试剂的方法造成动物，内循环受阻、脏器损伤。药物诱导产生模型较外科法有针对性，且种类范围更广，但是由于药物价格及剂量原因，在大动物上应用较少，且同样由于动物个体间差异，难以做到表型完全一致，无法满足规模制备和应用。

3)基因编辑技术制备动物疾病模型。通过基因工程技术来制备疾病模型，与外科手术制备和药物诱导2种方法相比，基因编辑技术可以做到表型一致。但是基因编辑技术的关键在于需要筛选到合适的候选基因及编辑位点，且基因编辑动物尤其是疾病模型类的基因编辑动物的存活率低等限制了其发展。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术的缺陷，提供一种基因工程编辑位点，用于高效制备易于诱导、可自然传代的非人哺乳动物肝损伤模型。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种ASGR1突变基因其为ASGR1基因第5外显子上的两个等位基因第2840～2859位发生突变。

突变是指生物体、病毒或染色体外DNA基因组核苷酸序列的改变。本发明所述突变包括一个或多个核苷酸的插入、缺少、替换。

在本发明所述多个为2个、3个、4个、……146个、147个……156个。

在本发明一些实施方案中，所述ASGR1突变基因为ASGR1基因第5外显子上的两个等位基因第2840～2859位均发生20bp删除，命名为(-20bp/-20bp)突变型ASGR1突变基因。

在本发明另一些实施方案中，所述ASGR1突变基因为ASGR1基因第5外显子上的一个等位基因第2817～2961位发生146bp删除，另一个等位基因第2852～2853位增加1bp，命名为(-146bp/+1bp)突变型ASGR1突变基因。