[发明专利]一种与中枢神经衰老相关的乙酰化修饰H2B蛋白标记分子及其应用

权利要求书

1.一种与中枢神经衰老相关的乙酰化修饰H2B蛋白标记分子，其特征在于：所述的与中枢神经衰老相关的乙酰化修饰H2B蛋白标记分子是第6位、第12位、第13位、第16位、第17位、第21位、第24位、第44位和第109位中的部分或全部赖氨酸经乙酰化修饰的H2B蛋白。

2.根据权利要求1所述的与中枢神经衰老相关的乙酰化修饰H2B蛋白标记分子，其特征在于：所述的H2B蛋白为H2B1M、H2B1B、H2B2B中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的与中枢神经衰老相关的乙酰化修饰H2B蛋白标记分子，其特征在于：所述的H2B1M的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述的H2B1B的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述的H2B2B的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.权利要求1～3任一项所述的与中枢神经衰老相关的乙酰化修饰H2B蛋白标记分子在细胞、组织、器官或个体衰老程度检测中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于包括如下步骤：

(1)动物细胞或组织的蛋白提取、纯化和定量；

(2)对纯化的蛋白进行酶解；

(3)特异性抗体对乙酰化修饰肽段富集；

(4)基于液相色谱质谱联用技术定量分析细胞或组织蛋白的乙酰化修饰；

(5)通过定量分析结果评估细胞、组织、器官或个体的衰老程度。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤(4)中所述的定量分析过程包括如下步骤：

1)将富集的乙酰化修饰肽段重悬，进行分离；

2)接着进行质谱鉴定，得到质谱原始数据；

3)质谱原始数据通过Maxquant软件进行搜库，从而获得肽段信息列表；

步骤(5)中所述的评估的标准如下：所述的与中枢神经衰老相关的乙酰化修饰H2B蛋白标记分子的总乙酰化修饰上调程度和衰老程度呈正相关。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：

步骤1)中所述的分离优选通过EasyNano LC1000系统进行；

步骤2)中所述的质谱鉴定为使用Orbitrap Fusion Lumos质谱仪；

步骤3)中所述的搜库的参数如下：a)样本类型为standard，multiplicity为1；b)蛋白质消化酶为：Trypsin；c)固定修饰：Carbamidomethyl C；d)可变修饰为Acetyl K，Deamidation N，Deamidation NQ；e)最小肽段长度为6；f)肽段和蛋白的错配率阈值都小于0.01；g)用于蛋白质定量的肽段修饰为Acetyl K，肽段为unique。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤(1)中所述的动物为小鼠；

步骤(1)中所述的组织为脑组织；

步骤(1)中所述的定量的方法为Bradford法；

步骤(2)中所述的酶解采用FASP酶解方法实现；

步骤(3)中所述的特异性抗体为抗乙酰赖氨酸抗体；

步骤(3)中所述的富集为通过免疫亲和沉淀实现。

9.权利要求1～3任一项所述的与中枢神经衰老相关的乙酰化修饰H2B蛋白标记分子在制备预测衰老相关的退行性疾病的试剂盒中的应用。

10.权利要求1～3任一项所述的与中枢神经衰老相关的乙酰化修饰H2B蛋白标记分子在制备预防和/或治疗衰老相关的退行性疾病的药物中的应用。