[发明专利]一种非洲猪瘟多克隆抗体及非洲猪瘟抗原检测试纸条

权利要求书

1.一种非洲猪瘟多克隆抗体，其特征在于，所述非洲猪瘟多克隆抗体通过采用非洲猪瘟抗原免疫实验动物制备得到，所述非洲猪瘟抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。

2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟多克隆抗体，其特征在于，所述非洲猪瘟抗原的制备方法包括下述步骤：(1)合成编码所述非洲猪瘟抗原的核苷酸序列并将其与载体连接，得到重组载体；(2)将所述重组载体转化表达菌株，得到工程菌株；(3)诱导所述工程菌株，使所述工程菌株表达所述非洲猪瘟抗原，经纯化即得所述非洲猪瘟抗原。

3.根据权利要求1-2中任意一项所述的非洲猪瘟多克隆抗体，其特征在于，所述实验动物为昆明小鼠或新西兰大白兔。

4.根据权利要求1-2中任意一项所述的非洲猪瘟多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：将所述非洲猪瘟抗原与佐剂混合后皮下多点注射实验动物，ELISA检测血清效价，效价达到1:1×10⁷后，心脏采血、分离血清、纯化即得所述非洲猪瘟多克隆抗体；所述非洲猪瘟抗原与佐剂等体积混合；首免采用弗氏完全佐剂，其余采用弗氏不完全佐剂。

5.一种非洲猪瘟抗原检测试纸条，所述试纸条包括依次搭接的样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，其特征在于，所述标记垫上包覆有非洲猪瘟鼠多克隆抗体-标记复合物，所述检测线上包覆有非洲猪瘟兔多克隆抗体，所述质控线处包被有羊抗鼠IgG；所述非洲猪瘟鼠多克隆抗体和非洲猪瘟兔多克隆抗体独立地选自如权利要求1-3中任意一项所述的非洲猪瘟多克隆抗体，其区别仅在于实验动物分别为小鼠和兔子。

6.根据权利要求5所述的非洲猪瘟抗原检测试纸条，其特征在于，所述非洲猪瘟鼠多克隆抗体-标记复合物为非洲猪瘟鼠多克隆抗体-胶体金复合物，所述非洲猪瘟鼠多克隆抗体-胶体金复合物的制备方法如下：向1％的氯金酸中加入双蒸水定容至1000mL，加热至沸腾后，加入1.0％的柠檬酸三钠溶液调节pH至其颜色变成酒红色；4-8min后室温冷却，过滤，得到胶体金溶液，4℃保存备用；向上述胶体金溶液中加入非洲猪瘟鼠多克隆抗体溶液，混匀，室温放置30min后加入1％BSA封闭，混匀后，室温放置10min，12000r/min，4℃，离心30min，弃掉上清后沉淀用10mL 20mM Na₂B₄O₇的重悬液重悬，即得所述非洲猪瘟鼠多克隆抗体-胶体金复合物。

7.根据权利要求6所述的非洲猪瘟抗原检测试纸条，其特征在于，所述非洲猪瘟鼠多克隆抗体的用量为0.06-0.24mg，所述非洲猪瘟兔多克隆抗体的浓度为1.0-2.0mg/mL；所述胶体金溶液中胶体金的粒径为30-40nm。

8.根据权利要求7所述的非洲猪瘟抗原检测试纸条，其特征在于，所述非洲猪瘟兔多克隆抗体的浓度为1.5mg/mL；所述胶体金溶液中胶体金的粒径为30nm。

9.一种非洲猪瘟抗原检测卡或试剂盒，其特征在于，所述检测卡或试剂盒包括如权利要求1-3中任意一项所述的非洲猪瘟多克隆抗体和/或如权利要求5-8中任意一项所述的非洲猪瘟抗原检测试纸条。