[发明专利]一种ELISA检测试剂盒的构建方法、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种ELISA检测试剂盒的构建方法，其特征在于，所述ELISA检测试剂盒的构建方法包括：

包被液配制：1.5g Na₂CO₃，2.9g NaHCO₃，800ml去离子水加去离子水定容至1L；

10XPBST洗液配制：81.8g NaCl，28.8g Na₂HPO₄·12H₂O，3.1g NaH₂PO₄·12H₂O，0.1g硫柳汞钠，800ml去离子水，5ml Tween20，200ul proclin300，加去离子水定容至1L；

1X PBST洗液配制：100ml 10X PBST洗液，加去离子水定容至1L；

封闭液配制：2g BSA溶解于100ml 1X PBST洗液；

抗体稀释液配制：1g BSA溶解于100ml 1X PBST洗液或者将50ml封闭液用1X PBST稀释一倍；

McIvain`s buffer配制：量取234ml 0.2M Na₂HPO₄和266ml 0.1M柠檬酸，混匀；

显色液配制：量取2ml 10mg/ml ABTS、18ml McIlvain`s缓冲液和0.1ml 30％H₂O₂，混匀；

磷酸盐缓冲液配制：称取5.68g Na₂HPO₄、1.56g NaH₂PO₄·H₂O，溶解于80ml去离子水中，调pH后加去离子水至100ml。

2.如权利要求1所述ELISA检测试剂盒的构建方法，其特征在于，所述包被液1L配制中去离子水pH9.6；

10XPBST洗液1L配制中去离子水pH7.4。

3.如权利要求1所述ELISA检测试剂盒的构建方法，其特征在于，封闭液配制中，封闭液为100ml，2％BSA；

抗体稀释液配制中，抗体稀释液为100ml，1％BSA。

4.如权利要求1所述ELISA检测试剂盒的构建方法，其特征在于，McIvain`s buffer配制中，Na₂HPO₄和柠檬酸混合后调pH至4.6；

0.5M磷酸盐缓冲液配制中，pH7.4，100ml；Na₂HPO₄、NaH₂PO₄·H₂O，溶解于去离子水中，调pH至7.4。

5.一种利用权利要求1～4任意一项所述构建方法构建的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述ELISA检测试剂盒包括：包被液、包被重组纯化EGFR蛋白的96孔酶标板、PBST洗液、封闭液、抗体稀释液、显色液、McIvain`s buffer液、磷酸盐缓冲液。