[发明专利]建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法

权利要求书

1.建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：测定替米考星对猪胞内劳森菌的药效学和在猪体内的药动学参数：采用荧光定量PCR法计数，绘制猪胞内劳森菌在猪空肠上皮细胞IPEC-J2中的生长曲线；

采用过氧化物酶细胞单层染色法计数，测定替米考星对猪胞内劳森菌胞内和胞外最低抑菌浓度MIC；

采用荧光定量PCR法计数，绘制替米考星对猪胞内劳森菌体外和半体内胞内杀菌曲线；

采用荧光定量PCR法计数，测定替米考星对猪胞内劳森菌的防突变浓度；以及采用荧光定量PCR法计数，测定替米考星对猪胞内劳森菌的抗菌后效应；

步骤2：根据步骤1所测的替米考星对猪胞内劳森菌半体内胞内杀菌曲线，选择PK-PD参数，使用Winnolin软件模拟Sigmoid E_max PK-PD模型方程，计算替米考星对猪胞内劳森菌不同抗菌效应下的药效学靶值，将替米考星达到不同抗菌效应目的所对应的药效学靶值代入剂量计算方程中，计算得到抑菌、杀菌和根除下的给药剂量，建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型，制定出合理的给药方案。

2.如权利要求1所述的建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法，其特征在于，所述猪胞内劳森菌为从疑似猪增生性肠炎的回肠病料中分离得到的菌株，并经过PCR定性检测所述菌株和荧光定量PCR定量检测所述菌株的浓度。

3.如权利要求1所述的建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法，其特征在于，步骤1中替米考星对猪胞内劳森菌的药动学参数的获取包括以下步骤：建立仔猪瘘管模型，设置实验组和对照组，用所分离的猪胞内劳森菌菌株对实验组进行攻毒，建立人工感染猪胞内劳森菌的瘘管模型，两组动物均按照体重灌胃给药，给药后不同时间点取血浆和回肠内容物，用高效液相色谱法检测血浆和回肠内容物中的替米考星药物浓度。

4.如权利要求1所述的建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法，其特征在于，所述防突变浓度的测定，是以所测定的替米考星对猪胞内劳森菌的胞内最低抑菌浓度为基准，配制含不同浓度替米考星的细胞培养基，经过观察5天后仍不出现菌落的最低药物浓度为初始防突变浓度MPC_pr，再以MPC_pr为基线，线性递减20％抗菌药物浓度，制备不同浓度替米考星的细胞培养基，并以5天后仍不出现菌落的最低药物浓度即为最终的MPC。

5.如权利要求1所述的建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法，其特征在于，所述抗菌后效应是以所测定的替米考星对猪胞内劳森菌的胞内最低抑菌浓度为基准，配制含不同浓度替米考星的细胞培养基，诱导PAE的产生，同时设只含有IPEC-J2细胞和猪胞内劳森菌的两个对照组，并对实验组和对照组进行药物去除和重建，用荧光定量PCR测定不同时间点的猪胞内劳森菌含量，建立对照组和实验组重建后恢复生长的动力学曲线，计算PAE。

6.如权利要求1所述的建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法，其特征在于，根据所测的替米考星对猪胞内劳森菌半体内胞内杀菌曲线，选择合适的PK-PD参数，即(AUC/MIC)_ex，使用Winnolin软件模拟Sigmoid E_max PK-PD模型方程，计算替米考星对猪胞内劳森菌不同抗菌效应下的药效学靶值，将替米考星达到不同抗菌效应目的所对应的(AUC/MIC)_ex值代入剂量计算方程I中，求出替米考星达到不同抗菌效应时所需的给药剂量：

其中，公式I中，Dose表示给药剂量；(AUC/MIC)_ex表示指对应不同治疗效应(杀菌、抑菌和根除)的PK-PD参数值；CL指替米考星在猪消化道中清除率；F为生物利用度；MIC为猪胞内劳森菌的胞内MIC值；fu表示游离药物浓度的比例。

7.如权利要求1-6任一项所述的建立替米考星对猪胞内劳森菌的PK-PD同步模型的方法制定替米考星对猪胞内劳森菌的给药方案。