[发明专利]一种“红花”五味子愈伤组织再生植株的方法

说明书

本发明公开了一种“红花”五味子愈伤组织再生植株的方法，涉及植物组织培养技术领域，包括以下步骤：胚性愈伤组织的诱导、胚性愈伤组织的增殖与扩繁、胚的发生、胚的发育及植株再生、再生植株的移栽。本发明利用“红花”五味子的叶片作为愈伤组织再生植株为五味子优良种质繁殖奠定基础，有利于优良种质的保存，更好直接得到母体优良性状。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种“红花”五味子愈伤组织再生植株的方法。

背景技术

植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在无菌条件下接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义是指组培，指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。

植物组织培养的成败与外植体类型本身密切相关，外植体选择是否适宜，以及对其处理方法是否得当，直接关系到组织培养的难易程度和培养方向。作为诱导胚性愈伤组织的材料可以有很多种，如幼苗、下胚轴、离体的根、茎、叶等。这些外植体的类型、生理状态及取材部位都直接影响体胚性愈伤组织的诱导，它们之间有较大的差异，五味子诱导胚性愈伤组织用到的外植体材料有成熟种子发芽后的合子胚和子叶以及下胚轴、北五味子冬芽、嫩茎段、叶片、叶柄等。

现有技术中，大部分研究从诱导率、诱导天数等特征方面考虑，现有记载中，五味子种子的合子胚是诱导胚性愈伤组织的最佳外植体，其次是下胚轴，鲜有叶片为诱导胚性愈伤组织的最适外植体的研究。而合子胚及下胚轴均属于种子的组成部分，会保留亲代中父本和母本的杂合性状，对于母本性状保持不利。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种“红花”五味子愈伤组织再生植株的方法，采用“红花”五味子的叶片为外植体，通过无性繁殖进行胚性愈伤组织的诱导，并通过体细胞胚发生途径形成再生植株，能够更好更直接的获得母体优良性状。

一种“红花”五味子愈伤组织再生植株的方法，包括以下步骤：

S1，胚性愈伤组织的诱导，

选用“红花”五味子的无菌苗叶片接种于1号培养基，培养28-32天后转移至新的1号培养基中继续培养28-32，然后切除黄褐色坚硬部分后，再转移至新的1号培养基继续培养28-32天，获得胚性愈伤组织；

S2，胚性愈伤组织的增殖与扩繁，

将S1中获得的所述胚性愈伤组织接种到2号培养基中培养28-32天，获得后期胚性愈伤组织；

所述2号培养基以MS培养基为基础，添加有浓度为0.1-02mg/L的2，4-D和浓度为0.1-0.2mg/L的TDZ；

S3，胚的发生，

将S2中获得的后期胚性愈伤组织切成0.4-0.6cm³的团块接种到3号培养基中培养28-32天，获得胚状体；

所述3号培养基以MS培养基为基础，添加有浓度为0.2-0.5mg/L的ABA；

S4，胚的发育及植株再生，

将S3中获得的胚状体接种到MS培养基中进行胚发育，28-32天后获得子叶形胚和长出胚根的胚，将所述子叶形胚和长出胚根的胚接种至新的MS培养基中继续培养28-30天，形成幼苗；

S5，再生植株的移栽，

待S4中获得的幼苗形成完整植株后炼苗2-4天，从瓶中取出完整植株，洗净根部的培养基，将其移栽到混合的无菌沙子和泥土中。