[发明专利]用于定性检测艾滋病病毒的试剂和方法

权利要求书

1.一组用于通过多重荧光PCR扩增反应检测艾滋病病毒的引物对，其中所述引物对包括：

LTR上游引物：5'-AAGGCTACTTCCCTGATT-3'(SEQ ID NO:1)；

LTR下游引物：5'-TTGGCTTCTTCTAACTTCTC-3'(SEQ ID NO:2)；

GAG上游引物：5'-CAGAATGGGATAGAGTGC-3'(SEQ ID NO:4)；

GAG下游引物：5'-TACTGGGATAGGTGGATT-3'(SEQ ID NO:5)；

POL上游引物：5'-TAAGACAGCAGTACAAATGGCAG-3'(SEQ ID NO:7)；

POL下游引物：5'-GCTGTCCCTGTAATAAACCCG-3'(SEQ ID NO:8)。

2.根据权利要求1所述的引物对，其中所述引物对还包括针对β-肌动蛋白(ACTB)的引物对：

ACTB上游引物：5'-ATTTGGACCTGCGAGCG-3'(SEQ ID NO:10)；

ACTB下游引物：5'-AGCGGCTGTCTCCACAAGT-3'(SEQ ID NO:11)。

3.一个用于通过多重荧光PCR扩增反应检测艾滋病病毒的试剂盒，其中所述试剂盒包括：权利要求1或2所述的引物对。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括以下荧光探针：

LTR荧光探针：5'-FAM-CAAGCTAGTACCAGTT-ECLIPSE-3'(SEQ ID NO:3)；

GAG荧光探针：5'-HEX-GAGTGCATCCAGTGCAT-ECLIPSE-3'(SEQ ID NO:6)；

POL荧光探针：5'-CY5-ATTACAGGGACAGCAGAA-ECLIPSE-3'(SEQ ID NO:9)。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括以下荧光探针：

ACTB荧光探针：5'-TEXASRED-CTGACCTGAAGGCTCTGC-ECLIPSE-3'(SEQ ID NO:12)。

6.一种用于通过多重荧光PCR扩增反应对艾滋病病毒进行检测的方法，所述方法用于非诊断目的，包括以下步骤：

(1)提取待测样品DNA；

(2)以待测样品DNA为模板，使用权利要求1所述的引物对、或者权利要求3所述的试剂盒来进行多重荧光PCR扩增反应；

(3)对所述多重荧光PCR扩增反应结果进行判断：

若被扩增的三个基因中有两个或者三个基因的Ct值﹤35并且扩增曲线呈S型，则判断存在艾滋病病毒，

若被扩增的三个基因中没有一个呈现扩增曲线或者存在Ct值，则判断不存在艾滋病病毒，

若被扩增的三个基因中仅有一个的Ct值﹤35并且扩增曲线呈S型，则判断不确定是否存在艾滋病病毒。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述多重荧光PCR扩增反应的条件为：

-预变性温度：94℃，预变性时间：5分钟；

-45个如下循环：

变性温度：94℃，变性时间：30秒；

退火温度：50℃，退火时间：30秒；

延伸温度：72℃，延伸时间：1分钟30秒。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中，在25μL的所述多重荧光PCR的反应体系中，包括：10×Ex Taq PCR缓冲液、2.5mmol/L Mg²⁺、0.25mmol/L dNTP、1.5U Ex Taq聚合酶、0.05μmol/L LTR上游引物、0.05μmol/L LTR下游引物；0.05μmol/L GAG上游引物、0.05μmol/LGAG下游引物、0.05μmol/L POL上游引物、0.05μmol/L POL下游引物、以及5.0μL DNA模板。