[发明专利]VI-E型和VI-F型CRISPR-Cas系统及用途有效
| 申请号： | 202010390901.1 | 申请日： | 2020-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN112410377B | 公开（公告）日： | 2022-09-13 |
| 发明（设计）人： | 杨辉;胥春龙;周英思;肖庆全 | 申请（专利权）人： | 辉大（上海）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/10;C12N9/22;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N15/86;C12N15/861;C12N15/863;C12N5/10;C12N15/11;C12Q1/6841;A61K48/00;A61P35 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200131 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | vi crispr cas 系统 用途 | ||
1.一种CRISPR-Cas复合物，其包括：
（1）RNA向导序列，其含有能够与靶RNA杂交的间隔区序列，以及在该间隔区序列的3’端的、由SEQ ID NO: 8编码的同向重复序列；和，
（2）CRISPR关联蛋白Cas的功能片段，所述CRISPR关联蛋白Cas为SEQ ID NO：1的氨基酸序列；
其中所述Cas的功能片段能够（i）结合至所述RNA向导序列，和（ii）靶向所述靶RNA，
所述Cas的功能片段的氨基酸序列为在SEQ ID NO：1基础上在N端缺失0或180个残基且在C端缺失150个残基。
2.权利要求1所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述靶RNA由真核DNA编码。
3.权利要求2中所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述真核DNA是非人类哺乳动物DNA、人类DNA、植物DNA、昆虫DNA、鸟类DNA、爬行动物DNA、鱼类DNA、蠕虫/线虫DNA或酵母DNA。
4.权利要求2中所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述真核DNA是非人类灵长类DNA。
5.权利要求2中所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述真核DNA是啮齿动物DNA。
6.权利要求1所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述靶RNA是mRNA。
7.权利要求1所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述间隔区序列在15-60个核苷酸之间。
8.权利要求1所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述间隔区序列在25-50个核苷酸之间。
9.权利要求1所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述间隔区序列为30个核苷酸。
10.权利要求1-9中任一项所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述间隔区序列与所述靶RNA为90-100％互补。
11.权利要求1所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述功能片段还包含RNA碱基编辑结构域。
12.权利要求11所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述RNA碱基编辑结构域是腺苷脱氨酶。
13.权利要求12所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述RNA碱基编辑结构域是双链RNA特异性腺苷脱氨酶；或催化多肽样载脂蛋白B mRNA编辑酶；或激活诱导的胞苷脱氨酶。
14.权利要求13所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述双链RNA特异性腺苷脱氨酶为ADAR1或ADAR2。
15.权利要求14所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述ADAR2具有E488Q / T375G双重突变。
16.权利要求14所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述ADAR2为ADAR2DD。
17.权利要求1所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述碱基编辑结构域进一步与RNA结合结构域融合。
18.权利要求17所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述RNA结合结构为MS2。
19.权利要求1所述的CRISPR-Cas复合物，其中所述功能片段还包含RNA甲基转移酶、RNA脱甲基酶、RNA剪接修饰剂、定位因子或翻译修饰因子。
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