[发明专利]一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养液

权利要求书

1.一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养液，包括SOF基础培养基，其特征在于，所述培养液还包括以下添加剂：孕酮、维生素E、L-肉碱、FGF、皮质酮、瓜氨酸、EGF、IGF和LIF。

2.根据权利要求1所述的一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养液，其特征在于，所述孕酮的浓度为1-100ng/mL，维生素E的浓度为10-1000μM，L-肉碱的浓度为0.1-30mM，FGF的浓度为1-100ng/mL，皮质酮的浓度为1-100ng/mL，瓜氨酸的浓度为0.01-1mg/mL,EGF的浓度为1-100ng/mL，IGF的浓度为1-100ng/mL，LIF的浓度为1-100ng/mL。

3.根据权利要求1或2所述的一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养液，其特征在于，所述培养液还包括必需氨基酸、非必需氨基酸、无脂肪酸牛血清白蛋白、胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂、β-巯基乙醇、亚牛磺酸、1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸钠盐和红景天苷。

4.根据权利要求3所述的一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养液，其特征在于，所述必需氨基酸体积分数为0.1-2％，非必需氨基酸体积分数为0.1-2％，无脂肪酸牛血清白蛋白浓度为1-10mg/mL，胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂体积分数为0.1-2％，β-巯基乙醇浓度为10-100μM，亚牛磺酸浓度为1-10mM，1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸钠盐浓度为0.1-1μg/mL，红景天苷浓度为0.01-0.2mM。

5.根据权利要求4所述的一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养液，其特征在于，每100mL所述SOF基础培养基包括26.168mg CaCl₂·2H₂O、9.999mg C₆H₅Na₃O₇·2H₂O、2.923mg谷氨酰胺、37.218mg MgSO₄·7H₂O、49.904mg肌醇、1.000mg酚红、53.378mgKCl、16.195mg KH₂PO₄、4.402mg丙酮酸钠、210.025mg NaHCO₃、629.399mg NaCl和0.0757mg乳酸钠。

6.根据权利要求5所述的一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养液，其特征在于，所述培养液还包括12μg/mL庆大霉素。

7.一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养方法，其特征在于，将牛体外受精胚或者克隆胚置于权利要求1-6中任一项所述的培养液中进行培养。

8.根据权利要求7所述的一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养方法，其特征在于，将所述培养液预热至少2小时，将牛精卵结合12-16h的体外受精胚或在6-DMAP中完成化学激活的体细胞克隆胚加入所述培养液中，CO₂培养箱中培养7-8天。

9.根据权利要求8所述的一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养方法，其特征在于，将所述体外受精胚或者所述体细胞克隆胚在38.5℃、5％CO₂、7％O₂饱和湿度下培养。