[发明专利]一种具有NTCP过表达的树鼩动物模型的构建方法

说明书

本发明涉及动物模型的建立方法，公开了一种具有NTCP过表达的树鼩动物模型的构建方法，其包括步骤一、将miR‑142‑3p inhibitor质粒稳定转染于HBV感染阳性肝癌细胞，miR‑142‑3p mimic质粒转染HBV感染阴性HBV肝癌细胞；步骤二、分别取对数生长期细胞，胰酶消化后无血清培养基重悬细胞，调整细胞浓度为1×107个/ml；步骤三、按照1×106个/只的细胞量接种至树鼩腋下，每周对树鼩肿瘤直径进行测量；步骤四、5周后处死树鼩，测量树鼩肿瘤大小，并对NTCP蛋白进行检测。本发明得出过表达miR‑142‑3p能够上调NTCP的表达水平，继而通过该结论能够建立针对性的基因型动物模型。

技术领域

本发明涉及动物模型的建立方法，尤其涉及了一种具有NTCP过表达的树鼩动物模型的构建方法。

背景技术

NTCP指钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白，通常在人肝细胞表面表达。

钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)是第10个溶质转运蛋白(SLC3A2)家族的一名成员，其负责调控肝肠的胆汁酸循环，以维持机体的胆汁酸平衡。

2012年研究发现NTCP蛋白是乙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒感染肝细胞的功能性受体，主要功能是通过结合细胞表面受体分子来实现对宿主细胞的感染。所以构建具有NTCP过表达的动物模型对乙肝的治疗及对NTCP的功能的进一步阐述具有重大意义。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的问题，提供了一种具有NTCP过表达的树鼩动物模型的构建方法。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：

一种具有NTCP过表达的树鼩动物模型的构建方法，其包括以下步骤：

步骤一、将miR-142-3p inhibitor质粒稳定转染于HBV感染阳性肝癌细胞，miR-142-3p mimic质粒转染HBV感染阴性HBV肝癌细胞；

步骤二、分别取对数生长期细胞，胰酶消化后无血清培养基重悬细胞，调整细胞浓度为1×107个/ml；

步骤三、按照1×106个/只的细胞量接种至树鼩腋下，每周对树鼩肿瘤直径进行测量；

步骤四、5周后处死树鼩，测量树鼩肿瘤大小，并对NTCP蛋白进行检测。

作为优选，所述的树鼩使用5周龄的树鼩。

作为优选，步骤四中树鼩肿瘤大小，按照体积V＝最短直径×最长直径×0.5计算。

作为优选，步骤三中接种方法为静脉注射，每周注射1次。

本发明由于采用了以上技术方案，具有显著的技术效果：

本发明得出过表达miR-142-3p能够上调NTCP的表达水平，继而通过该结论能够建立针对性的基因型动物模型。

附图说明

图1是miR-142-3p在HBV感染阳性肝癌细胞外泌体中表达水平示意图。

图2是miR-142-3p在HBV感染阳性肝癌细胞外泌体中表达水平的qRT-PCR结果示意图。

图3是miR-142-3p在共培养系统T淋巴细胞中的表达水平示意图。

图4是过表达miR-142-3p对Gln转运和xCT相关蛋白表达水平的影响示意图。

图5是miR-142-3p与SLC3A2之间的靶向关系示意图。

具体实施方式

下面结合附图与实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1