[发明专利]长链非编码RNA IL21-AS1及其用途

说明书

本发明提供了一种长链非编码RNA IL21‑AS1、能够表达长链非编码RNA IL21‑AS1的载体及其用途；还给出了将Naive T CD4+T细胞诱导成TFH细胞的方法，以及非编码RNA IL21‑AS1在制备用于诱导分泌IL‑21的物质中的用途。

技术领域

本发明涉及本发明涉及生物医学领域，具体涉及长链非编码RNA及其用途。

背景技术

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA，一般长度在200-100000nt之间，不编码蛋白质的转录本。根据在基因组的定位和背景，LncRNA分为反义长非编码、内含子非编码、基因间、非翻译区lncRNA等。LncRNA在生命科学研究领域具有重要作用，涉及DNA 复制、转录调控、细胞内物质运输、染色体重塑、表观遗传、参与细胞分化、细胞凋亡等。LncRNA参与在机体生长发育、应激反应和疾病包括癌症、自身免疫性疾病、心血管疾病的发生发展等进程。

表达载体是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件如启动子、RBS、终止子等，使目的基因能够表达的载体。构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端，多为黏性末端，也有平末端，采用DNA连接酶连接，导入生物体实现克隆表达。

滤泡辅助性T细胞(Follicular helper Tcell,TFH)，是重要的辅助性 (Thelpercell,Th)细胞亚群，主要来源于扁桃体组织，定位淋巴滤泡。TFH 不同于Th1、Th2、Th17等CD4+T细胞，其表型为CXCR5+ICOS+PD1+，胞内转录因子BCL-6和TOX2高表达，合成大量分泌的IL-21。TFH的主要功能是辅助 B细胞活化和成熟：TFH高表达CXCR5与CXCL3结合迁移至滤泡区参与生发中心(germinal center,GC)的形成，TFH分泌的IL-21，诱导B细胞分化成熟为浆细胞,分泌IgM、IgG和IgA，亦可调节Ig的同型转换。TFH数量过多或者功能过强导致自身免疫病,反之导致免疫缺陷病。TFH参与自身免疫性疾病如SLE、RA、Graves病和肿瘤的发生发展。Naive CD4+T细胞体外诱导分化 TFH的条件已经成熟，为研究TFH的发育、分化和功能提供细胞模型。

长非编码RNA是否参与TFH的发育和分化，及其具体功能尚未知晓，本发明解决了这些问题中的至少一部分。

发明内容

本发明提供了长链非编码RNA IL21-AS1的全长序列(SEQ ID No：1)。

本发明还提供了表达载体，其能够表达长链非编码RNA IL21-AS1；前述表达载体可以是质粒或者病毒；优选地，前述质粒是pcDNA3.1表达质粒。

本发明提供了一种Naive CD4+T细胞，其含有上文所述的表达载体。本发明还提供了构建前述Naive CD4+T细胞的方法，所述方法包括将前述表达载体转染至Naive CD4+T细胞，优选地，使用含有长链非编码RNA IL21-AS1的 pcDNA3.1-IL21-As1表达载体转染至Naive CD4+T细胞。

本发明提供了一种将Naive CD4+T细胞诱导成滤泡辅助性T细胞的方法，所述方法包括：将含有长链非编码RNA IL21-AS1的pcDNA3.1-IL21-As1表达载体电转染至Naive CD4+T细胞，然后所获得的经转染细胞继续培养3天。本发明的内容也包括了通过前述方法所获得的滤泡辅助性T细胞。

本发明提供了长链非编码RNA IL21-AS1以及含有长链非编码RNA IL21-AS1的表达载体在制备用于诱导Naive CD4+T细胞分化为滤泡辅助性T 细胞的物质的用途。进一步地，所获得的滤泡辅助性T细胞中IL-21表达增加，所述增加是指与自然生成的滤泡辅助性T细胞中的IL-21表达相比。