[发明专利]木犀草素作为抑制赭曲霉毒素A肾毒性的食物营养素的应用

说明书

木犀草素作为抑制赭曲霉毒素A肾毒性的食物营养素的应用。LUT通过恢复细胞活力和阻止LDH释放而发挥其预防作用。它通过减少ROS积累，改善线粒体膜电位降低，使抗氧化酶活性恢复到对照水平，从而减轻OTA诱导的氧化应激和脂质过氧化。通过细胞免疫荧光实验、报告基因质粒转染实验和荧光定量PCR反应分析和评价Nrf2和HIF‑1α在此过程中的调控作用。结果表明，LUT激活了Nrf2途径，提高了细胞对抗OTA所致氧化性损伤的防御能力。此外，LUT还通过调节HIF‑1α通路，启动血管生成和上皮修复过程，从而促进细胞进行损伤后修复。本发明揭示了LUT作为黄酮类膳食补充剂在抑制OTA以及其它真菌毒素方面具有较好的应用潜力，可开发为抑制OTA肾毒性的食物营养素，从而拓展LUT的用途。

技术领域

本发明涉及生物医药，具体涉及木犀草素作为抑制赭曲霉毒素A肾毒性的食物营养素的应用。

背景技术

赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)这一真菌毒素污染物，具有严重的肾毒性，是国际社会普遍关注的食品安全问题。木犀草素(luteolin,LUT)作为一种广泛存在于天然植物或食品中的营养素，因其显著的抗氧化能力，越来越受到科学家的关注。

发明内容

发明人经过大量实验研究发现食物营养素LUT通过中和ROS累积发挥抑制OTA所致肾细胞毒性的作用。LUT激活Nrf2通路增加了细胞抗氧化损伤的能力；同时LUT还通过调控HIF-1α通路从而启动损伤后的修复过程。OTA诱导ROS累积在0-24h内呈现先上升后下降再上升的过程，且在1h和24h存在2个峰值。表明LUT可开发为抑制OTA肾毒性的食物营养素。

与现有技术相比，本发明的有益效果：LUT作为黄酮类膳食补充剂在抑制OTA以及其它真菌毒素方面具有较好的应用潜力，可开发为作为抑制OTA肾毒性的食物营养素，从而拓展LUT的用途。

附图说明

图1木犀草素(LUT)对赭曲霉毒素A(OTA)所致肾细胞毒性的抑制作用实验；

图2木犀草素(LUT)对赭曲霉毒素A(OTA)所致细胞膜的完整性(A-F)和细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)渗漏(G)的影响实验；

图3赭曲霉毒素A(OTA)所致ROS累积的时间关系图，OTA浓度为50μM，作用时间为(A)0h，(B)1h，(C)3h，(D)6h，(E)12h，(F)24h；

图4木犀草素(LUT)对赭曲霉毒素A(OTA)所致ROS累积的抑制作用实验，(a)0.1％DMSO，(b)50μM OTA，(c)50μM OTA+100μM LUT，(d)100μM LUT。作用时间分别为(A)1h和(B)24h；

图5木犀草素(LUT)抑制赭曲霉毒素A(OTA)所致的线粒体膜电位下降，(A)0.1％DMSO组，(B)50μM OTA组，(C)50μM OTA+100μM LUT组，(D)100μM LUT组，作用时间为24h；左列代表线粒体膜电位较高，JC-1形成聚合物，呈红色荧光；中间列代表线粒体膜电位较低，JC-1为单体，呈绿色荧光；右列为左中列重叠后得到；

图6木犀草素(LUT)对赭曲霉毒素A(OTA)所致(A-D)Nrf2核转位和(E)ARE抑制的保护作用实验，实验分为4组，(A)为0.1％DMSO组，(B)50μM OTA组，(C)50μM OTA+100μM LUT组，(D)100μM LUT组，作用时间为24h。细胞用Nrf2一抗孵育后用荧光二抗孵育，细胞核用DAPI染色，然后置于荧光显微镜下观察拍照。(E)采用lipofectamine 8000转染p-ARE质粒24h后进行药物孵育，24h后依据荧光素酶报告基因检测试剂盒进行检测，ARE激活用RLU表示；