[发明专利]蛋白质样品浓度测定方式选择法及测定方法

权利要求书

1.一种选择蛋白质样品测定方式及参数的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)使用可变光程分光光度法(例如SoloVPE)测定样品中的蛋白质浓度，其中测量模式为快速斜率模式(Quick slope mode)，光程点个数(Data points)为8～10个，目标吸光度(Target Abs)为0.7～1.5，测得结果C₁；

若各光程点测得的最大吸光度A_max≤1.5，则选择采用步骤(1)的可变光程分光光度法和参数来测定蛋白质浓度；若各光程点测得的最大吸光度A_max＞1.5，则进行步骤(2)；

(2)采用蛋白质样品中蛋白质浓度测定的标准方法(例如使用紫外分光光度法通过称重稀释、经空白对照校正后测定蛋白质浓度)，测得结果C₂；

(3)比较C₁与C₂的相对差异，根据以下公式计算D％值：

D％＝|C₁-C₂|/C₂×100％

若D％不超过预设的阈值，例如D％≤2.0％，则选择采用步骤(1)的可变光程分光光度法和参数来测定蛋白质浓度；若D％超过了预设阈值，例如D％＞2.0％，则进行步骤(4)；

(4)调整可变光程分光光度法中所用参数设置，将快速斜率模式中的光程点个数设置为5～7，其他参数保持不变，再次测定蛋白质浓度，测得结果C₃；

(5)比较C₃与C₂的相对差异，根据以下公式计算D％值：

D％＝|C₃-C₂|/C₂×100％

若D％不超过预设的阈值，例如D％≤2.0％，则选择采用步骤(4)的可变光程分光光度法和参数来测定蛋白质浓度；如果D％超过了预设的阈值，例如D％＞2.0％，则采用步骤(2)的分光光度法来测定蛋白质浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过以不同浓度标准样品重复所述方法来确定适于所选方式和参数的样品浓度范围。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质为天然蛋白质或合成蛋白质，例如抗体、酶、激素、膳食蛋白；和/或所述蛋白质包含修饰，例如糖基化、甲基化、磷酸化、乙酰化、羟基化修饰；和/或所述蛋白质包含非天然氨基酸，例如D-氨基酸、吡咯赖氨酸。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质样品中的蛋白质浓度≥100mg/ml(例如≥120mg/ml、≥150mg/ml、≥180mg/ml、≥200mg/ml、≥250mg/ml、≥300mg/ml、≥400mg/ml、≥500mg/ml)，和/或消光系数值≥1.3(例如≥1.4、≥1.5、≥1.6、≥1.7、≥1.8、≥1.9、≥2.0)。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预设的阈值范围为D％≤5.0％、≤4.0％、≤3.0％、≤2.0％、≤1.5％、≤1.0％或≤0.5％。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，可变光程分光光度法测定中采用了SoloVPE仪器，例如所用光纤具有选自下组的一个或多个特征的SoloVPE仪器：

材质：二氧化硅和/或聚酰亚胺；

长度：57.2mm；

直径：＜1mm，例如0.7mm；

波长：190nm～1100nm。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的分光光度法为紫外分光光度法，例如采用紫外分光光度计，如Agilent Cary 100、岛津UVmini-1240、普析TU-1810等；和/或

所述步骤(2)中所用样品池为塑料或石英材质。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中称重稀释所用稀释剂和校正所用空白对照均为不含待测蛋白质的空白溶液，例如不含待测蛋白质的制剂处方溶液。