[发明专利]一种微藻制备D-阿洛酮糖的方法

权利要求书

1.一种微藻制备D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将微藻进行酶解处理，得到含有糖化产物的混合物；

(2)将步骤(1)得到的混合物与大肠杆菌重组菌株混合进行异构化反应，得到葡萄糖/果糖/D-阿洛酮糖的混合物，将混合物分离，得到D-阿洛酮糖；

所述的大肠杆菌重组菌株含有D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因DPE和木糖异构酶基因XYLA。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中的酶解处理具体为：将微藻和纤维素酶混合，纤维素酶的加入量为10-200PFU/g微藻干物质，在pH为4.0-6.0，温度为30-50℃的条件下反应48-72h。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中的异构化反应是在pH为6-10，温度为30-60℃的条件下反应24-72h；所述的异构化反应体系含有Co²⁺，Mg²⁺，Mn²⁺金属离子中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因DPE克隆于根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)CGMCC 1.1488，木糖异构酶基因XYLA克隆于大肠杆菌(E.coli)MG1665。

5.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，所述的D-阿洛酮糖3-差向异构酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，木糖异构酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的D-阿洛酮糖3-差向异构酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，木糖异构酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示。

7.根据权利要求1、4或6所述的制备方法，其特征在于，所述的D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因DPE和木糖异构酶基因XYLA单独或者串联连接于大肠杆菌表达载体pET-28a(+)上，在T7强启动子的作用下，实现D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因DPE和木糖异构酶基因XYLA的过量表达。

8.一种重组表达载体，其特征在于，含有D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因DPE和木糖异构酶基因XYLA；所述的D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因DPE的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，木糖异构酶基因XYLA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

9.一种重组菌株，其特征在于，含有权利要求8所述的重组表达载体。

10.权利要求8所述的重组表达载体或权利要求9所述的重组菌株在生物转化制备D-阿洛酮糖中的应用。