[发明专利]四重RT-PCR特异性扩增引物组及其同步检测4种火龙果病毒的方法

权利要求书

1.一种同步检测4种火龙果病毒的四重RT-PCR方法，其特征在于，具体步骤如下：

S1、提取试剂盒提取待测火龙果样品总RNA；

S2、以所提取的总RNA为模板，反转录合成第一链cDNA；

S3、以获得的cDNA为模板加入四重RT-PCR特异性扩增引物组对进行PCR扩增；

S4、扩增后将所得的产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，利用凝胶成像系统观察电泳结果并拍照记录；

在同一PCR体系中，所述四重RT-PCR特异性扩增引物组包括4组引物对：CVX-NTU-P6，CVX-P4，SchVX-P1，ZyVX-P2引物对，所述CVX-NTU-P6，CVX-P4，SchVX-P1，ZyVX-P2引物对的具体核苷酸序列如下：

CVX-NTU-P6F:GTCCACATTACCTAGCGTCGG；CVX-NTU-P6R:TGCTGGAATCACCTTTGAACAC；

CVX-P4F:CGCACTGACTAGGTCCACATTAC；CVX-P4R:GGAAGGTAGAAGAGAGCTGGTGAC；

SchVX-P1F：GACACAGAGAATCAC；SchVX-P1R:ACGATTACTGGCTTGAAGGTCC；

ZyVX-P2F:CACAAGGACGCCCTCCATAC；ZyVX-P2R:CATCTTCCGAGTGAGGTTGGG；

CVX-NTU-P6，CVX-P4，SchVX-P1，ZyVX-P2引物对的混合比例为1.2:1.2:1:1，混合使用浓度为0.5uM；

步骤S4中，所述电泳的条件为采用2-2.5％琼脂糖凝胶进行电泳分离，在电压5V/cm下，电泳35-45分钟。

2.如权利要求1所述的同步检测4种火龙果病毒的四重RT-PCR方法，其特征在于，所述4组引物对的扩增产物分别为654bp、512bp、387bp和308bp大小差异明显的4条扩增条带。

3.如权利要求1所述的同步检测4种火龙果病毒的四重RT-PCR方法，其特征在于，步骤S3中，按照以下程序进行PCR扩增：1)94℃预变性5min；2)90℃变性30sec；3)58℃退火30sec；4)72℃延伸45sec；循环步骤2)～4)35次；5)72℃延伸5min。

4.如权利要求1所述的同步检测4种火龙果病毒的四重RT-PCR方法，其特征在于，对步骤S4中若待检样品电泳可扩增出一条或者几条相应长度的条带，则表明样品中含有一种或者多种病毒。