[发明专利]一种肠癌类器官的培养基及培养方法

说明书

本发明提供一种肠癌类器官的培养基及培养方法，该培养基包括基础培养基Advanced DMEM/F12、特异性添加因子和无菌水；其中，所述基础培养基Advanced DMEM/F12和所述无菌水的质量比为：99:1；所述特异性添加因子包括：不含维生素A的B27、N‑acetylcysteine、EGF、Noggin、R‑spondin 1、Wnt3a、CHIR99021、thiazovivin、Gastrin I、青霉素链霉素混合液、Primocin。采用该培养基进行肠癌类器官的培养，能够维持原发组织的形态结构和基因特征，有效降低肠癌培养中的微生物污染风险，提高肠癌类器官培养的成功率和存活率。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及培养基及其应用，更具体涉及一种肠癌类器官的培养基及培养方法。

背景技术

肠癌是我国的十大恶性肿瘤之一，发病率约24/100000，也是近二三十年来发病率上升最快的肿瘤之一。肠癌包括结肠癌和直肠癌，肠癌的发病率从高到低依次为直肠、乙状结肠、盲肠、升结肠、降结肠及横结肠，近年有向近端(右半结肠)发展的趋势。肠癌早期无症状，或症状不明显，仅感不适、消化不良、大便潜血等。随着癌肿发展，症状逐渐出现，表现为大便习惯改变、腹痛、便血、腹部包块、肠梗阻等，伴或不伴贫血、发热和消瘦等全身症状。近年来，欧美肠癌发病率和死亡率出现下降，我国却出现增长趋势。数据显示，我国肠癌患者的5年生存率为52.7％，显著低于欧美和日韩等国。这主要因为我国肠癌的早诊早治率远落后于国外，约60％～70％的患者确诊时已是中晚期。目前，肠癌的治疗仍旧以手术为主，同时辅以放疗及化疗等以巩固治疗效果。虽然近年来业界在肠癌靶向治疗、免疫治疗等综合治疗方面取得了长足的进展，但总体预后并不乐观。

肠癌的病因尚未完全清楚，目前认为主要是环境因素与遗传因素综合作用的结果。肠癌的发生发展机制错综复杂，建立一套科学严谨的研究模型不但有利于肠癌的基础研究，而且有助于肠癌的诊断与治疗，有助于提高肠癌的生存率。类器官是衍生于干细胞或前体细胞的器官特异性细胞集合。体外培养的类器官在细胞成分和组织架构上与对应器官高度相似，并具备相应的功能学特征。与常规细跑培养在二维环境中培养单一细胞类群不同，类器官培养是在三维环境中培养出特定组织器官包含的多种细胞类群，其培养体系与体内微环境更为相似。因此，在各种器官生理病理的基础研究、精准医疗、药物筛选和开发、基因治疗、再生医学等方面，显示出巨大的应用前景。

虽然多种肿瘤组织使用不同的方法、不同的培养条件下可在体外成功培养为类器官，但是目前关于肠癌类器官的培养方法的研究及报道较少，尤其是具体的试验流程、操作步骤、培养条件、即培养基配方尚无太多报道。

发明内容

有鉴于此，有必要针对现有技术存在的问题，提供一种肠癌类器官的培养基及培养方法。本发明的技术方案为：

第一个方面，本发明提供一种肠癌类器官的培养基，包括基础培养基AdvancedDMEM/F12、特异性添加因子和无菌水；其中，所述基础培养基Advanced DMEM/F12和所述无菌水的质量比为：99:1；所述特异性添加因子包括：不含维生素A的B27，1-5×；N-acetylcysteine，0.2-5μM；EGF，10-100ng/ml；Noggin，20-500ng/ml；R-spondin 1，100-1000ng/ml；Wnt3a，50-200ng/ml；CHIR99021，1-10μM；thiazovivin，0.5-5μM；Gastrin I，5-50ng/ml；青霉素链霉素混合液，1-2×；Primocin，0.5-5mg/ml；上述特异性添加因子各组分的浓度均以其在基础培养基和无菌水的混合液中的浓度为准。