[发明专利]一种水稻增强子及鉴定方法

说明书

本发明公开了一种水稻增强子及鉴定方法。该水稻增强子为622bp的DNA分子，序列如SEQ ID NO.1。构建OsENHANCER1 reporter载体、正对照载体CaMV35S‑GFP reporter(SEQ ID NO.2)和负对照载体Enhancerless reporter(SEQ ID NO.3)，通过水稻原生质体转化进行鉴定。本发明增强子在基因转录过程中发挥重要作用，鉴定方法快速，便捷。

技术领域

本发明涉及增强子及鉴定方法，特别涉及一种水稻增强子及鉴定方法。

背景技术

增强子作为顺式调控元件，主要促进远距离的目标基因的转录。增强子无论位于基因的上游、下游或是基因内部，都可以发挥增强转录的作用。研究表明增强子具有细胞或组织特异性，这取决于细胞或组织中反式作用因子。增强子可以与一些特定反式作用因子而起作用。且与其自身序列方向无关。真核生物基因的转录是一个复杂的过程，增强子与多种调控因子共同参与转录调控，在细胞分化及个体发育中发挥着重要作用。近年来关于增强子的研究取得了很大进展。据报道，增强子可以作为转录因子的平台，其中一研究认为增强子区域会与启动子区域相互作用，形成环状结构，使作用于该增强子区域的转录因子可以促进目的基因转录。因此增强子是基因工程中重要的研究对象。

发明内容

发明目的：本发明目的是提供一种水稻增强子。

本发明的另一目的是提供所述水稻增强子的鉴定方法。

技术方案：本发明提供一种水稻增强子，基因序列如SEQ ID NO.1。

进一步地，所述水稻增强子来源于禾本科稻属粳稻日本晴(Oryza sativaL.spp.Japonica var.Nipponbare)，具体用引物以粳稻日本晴的基因组DNA为模板，扩增得到662bp的扩增产物。

进一步地，所述引物序列如下：

正向：5’-gtacaagtgactcgagctacggtttcgaggaaaaggggtt-3’

反向R：5’-atcttcatcttcatatatccgaacagcggatctgacgacg-3’。

所述的水稻增强子的鉴定方法，包括如下步骤：

(1)通过生物信息学分析，结合本实验室水稻DNaseI数据对日本晴基因组进行预测，获得增强子OsENHANCER1(SEQ ID NO.1)；

(2)将OsENHANCER1(SEQ ID NO.1)扩增后插入mini35s-GFP reporter(SEQ IDNO.4)，构建OsENHANCER1 reporter载体；

(3)构建正对照载体CaMV35S-GFP reporter(SEQ ID NO.2)和负对照载体Enhancerless reporter(SEQ ID NO.3)；

(4)水稻原生质体的制备与转化；

(5)转化后对OsENHANCER1的活性进行验证。

进一步地，所述步骤(3)中正对照载体构建方法为：以P1300LV载体为模板，扩增CaMV35S启动子；使用限制性内切酶AscI和XbaI将mini35s-GFP reporter载体线性化，用无缝连接试剂盒将上述2个片段快速连接，转化至大肠杆菌DH5 α中，筛选阳性转化子，得到正对照载体CaMV35S-GFP reporter(SEQ ID NO.2)。

进一步地，所述步骤(3)中负对照载体构建方法为：使用限制性内切酶BsaI将mini35s-GFP reporter载体线性化，将一段无功能序列插入线性化载体，连接后转化至大肠杆菌DH5 α中，筛选阳性转化子，得到负对照载体Enhancerless reporter(SEQ IDNO.3)。