[发明专利]一种水稻增强子及鉴定方法

权利要求书

1.一种水稻增强子，其特征在于：基因序列如SEQ ID NO.1所示。

2. 根据权利要求1所述的水稻增强子，其特征在于：所述水稻增强子来源于禾本科稻属粳稻日本晴Oryza sativa L. spp. Japonica var. Nipponbare，具体用引物以粳稻日本晴的基因组DNA为模板，扩增得到662bp的扩增产物。

3.根据权利要求2所述的水稻增强子，其特征在于：所述引物序列如下：

正向: 5’-gtacaagtgactcgagctacggtttcgaggaaaaggggtt-3’

反向R: 5’-atcttcatcttcatatatccgaacagcggatctgacgacg-3’ 。

4.权利要求1所述的水稻增强子的鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）通过生物信息学分析，结合本实验室水稻DNaseI数据对日本晴基因组进行预测，获得增强子OsENHANCER1，其序列如SEQ ID NO.1所示；

（2）将OsENHANCER1，其序列如SEQ ID NO.1所示，扩增后插入mini35s-GFP reporter，其序列如SEQ ID NO.4所示，构建OsENHANCER1 reporter载体；

（3）构建正对照载体CaMV35S-GFP reporter，其序列如SEQ ID NO.2所示，和负对照载体Enhancerless reporter，其序列如SEQ ID NO.3所示；

（4）水稻原生质体的制备与转化；

（5）转化后对OsENHANCER1的活性进行验证。

5.根据权利要求4所述的水稻增强子的鉴定方法，其特征在于：所述步骤（3）中正对照载体构建方法为：以P1300LV载体为模板，扩增CaMV35S启动子；使用限制性内切酶AscI和XbaI将mini35s-GFP reporter载体线性化，用无缝连接试剂盒将上述2个片段快速连接，转化至大肠杆菌DH5α中，筛选阳性转化子，得到正对照载体CaMV35S-GFP reporter，其序列如SEQ ID NO.2所示。

6.根据权利要求4所述的水稻增强子的鉴定方法，其特征在于：所述步骤（3）中负对照载体构建方法为：使用限制性内切酶BsaI将mini35s-GFP reporter载体线性化，将一段无功能序列插入线性化载体，连接后转化至大肠杆菌DH5α中，筛选阳性转化子，得到负对照载体Enhancerless reporter ，其序列如SEQ ID NO.3所示。