[发明专利]一种使用含有CpG寡聚脱氧核苷酸的复合佐剂的新冠COVID-19灭活疫苗

说明书

本发明公开了一种包含CpG寡聚脱氧核苷酸和铝佐剂的复合佐剂，以及使用该复合佐剂的新冠COVID‑19灭活疫苗。所述CpG寡聚脱氧核苷酸与铝佐剂复合使用，可产生强烈的免疫增强作用。将所述复合佐剂应用于新冠COVID‑19灭活疫苗中，可以很大程度的延长抗原在体内的滞留时间，降低了各种水解酶对其的水解作用。本发明提供的新冠COVID‑19灭活疫苗制备方法简单，质量易于控制，易于规模化生产，且安全性好，毒副作用低，特别适合在各类人群，包括中老年等免疫功能低下的人群中用于新型冠状病毒COVID‑19的预防和治疗。

技术领域

本发明涉及流行病预防及疫苗生产领域，具体涉及一种包含CpG寡聚脱氧核苷酸和铝佐剂的复合佐剂及使用该复合佐剂的新冠COVID-19灭活疫苗。

背景技术

2019年发现的新型冠状病毒COVID-19，属于冠状病毒β家族，可经呼吸道飞沫传播、接触和粪-口传播等途径传播，在人群中极易感染。目前对于新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法。截至2020年4月16日，全球累计确诊超过200万例，累计死亡超过13万例，亟需开发新冠病毒疫苗阻断病毒传播，保护全球人民健康。

在疫苗研制过程中，为了制备安全有效的疫苗，必须考虑佐剂的使用。佐剂与疫苗成份的配伍，使二者形成稳定、安全、具有免疫原性的疫苗复合物。因此，对疫苗使用的佐剂进行研究一直是疫苗研究过程中的重要环节。佐剂作为非特异性免疫增强剂对疫苗接种后诱导有效的免疫应答，发挥着至关重要的作用。

传统铝盐佐剂，包括氢氧化铝和磷酸铝和其组合物的应用最为广泛。尽管上述佐剂被广泛批准应用于疫苗制备中，但在实际应用中，单独使用低剂量的铝盐佐剂对疫苗的免疫增强作用有限，而提高剂量的铝盐佐剂在使用时常出现注射部位肿胀、出现肉芽肿、发烧、疼痛、发生过敏等副反应。因此，研制更为广谱、安全、高效，同时便于生产和使用的理想疫苗佐剂迫在眉睫。

发明内容：

本发明的第一目的是提供一种复合佐剂。本发明提供的复合佐剂中包含CpG寡聚脱氧核苷酸和铝佐剂。优选地，所述复合佐剂由CpG寡聚脱氧核苷酸和铝佐剂组成。

CpG是指由胞嘧啶(cytosine,C)与鸟嘌呤(guanine，G)经磷酸二酯键(phosphodiesterbonds，p)相连组成的二核苷酸，CpG二核苷酸及其5'端和3'端的各两个碱基构成CpG基序(CpG motifs)。CpG基序也被称为免疫刺激序列(immunostimulatorysequence,ISS)，而CpG ODN是指含有非甲基化的CpG基序的寡聚脱氧核苷酸。脊椎动物的免疫系统通过模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)将细菌基因组中的CpGDNA作为一种危险刺激信号进行识别，进而刺激机体产生免疫保护反应。

本发明所述铝佐剂选自氢氧化铝和磷酸铝，优选为氢氧化铝。从免疫应答机理上来讲，铝佐剂的免疫应答偏向于T辅助细胞2型(Th2)应答，其特征是Th2型细胞因子，例如IL-4和IL-5的分泌以及IgG1和IgE型抗体的产生。研究表明氢氧化铝佐剂可以激活Th2细胞分泌IL-4，并诱导MHC-II类分子和CD83，CD86等的表达，最终可诱导型体液免疫应答，但单细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答微弱或者不存在。而CpG ODN能够促进树突状细胞、巨噬细胞以及B细胞的成熟和活化，上调CD80、CD86、CD40和MHC-Ⅱ分子的表达，促进IL-6、IL-12、IFN-γ等Thl型细胞因子的分泌，诱导机体产生Thl型免疫反应。此外，CpG ODN经内吞作用摄入免疫细胞后，被细胞中内体/溶酶体上的TLR9识别并与其结合，导致TLR9二聚体化，最终促使相关免疫细胞分泌一系列的细胞因子及趋化因子，触发胞内的杀菌机制或诱发炎症反应，产生强CTL诱导效应。

本发明将传统铝佐剂与CpG寡聚脱氧核苷酸结合使用，可以实现在免疫机理上的互补，同时激发细胞免疫和体液免疫，产生更强的免疫效果。通过平衡Th1型和Th2型免疫应答，从而降低发生ADE风险。