[发明专利]一种重金属经口生物可及性与毒性检测体系的建立方法

权利要求书

1.一种重金属经口生物可及性检测体系的建立方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）分别构建人体外胃肠消化模型和人小肠上皮细胞3D模型；

2）对所述人体外胃肠消化模型分别施加含不同浓度重金属的物质模拟人体消化过程，收集得到含重金属的消化液；

3）对所述人小肠上皮细胞3D模型分别施加所述含重金属的消化液培养预定时间，以模拟小肠吸收过程；

4）追踪人体外胃肠消化过程及人小肠上皮细胞吸收过程重金属价态及浓度的变化，计算经口生物可及性，建立经口暴露重金属浓度与生物可及性的关系曲线；

所述步骤1）中，基于静态体外消化InfoGest2.0方法建立人体外胃肠消化模型，禁食状态下的模拟胃液pH调整为1.8，组分及其浓度包括：氯化钾6.9mM、磷酸二氢钾0.9mM、碳酸氢钠25mM、氯化钠47.2mM、六水合氯化镁0.12mM、碳酸铵0.5mM、盐酸15.6mM、二水合氯化钙0.15mM、胃蛋白酶2000U/ml、胃脂肪酶60U/ml、抗坏血酸175μM、谷胱甘肽18μM；

所述步骤1）中，构建人小肠上皮细胞3D模型的步骤包括：将生长状态良好的Caco-2和HT29-MTX按9：1的比例、密度为10万/孔，接种于Transwell小室顶侧PET膜上，于37℃、5%CO₂培养箱中培养21天；

所述步骤2）中，不同浓度重金属的范围为0-20mg/L；所述重金属为铬。

2.根据权利要求1所述的重金属经口生物可及性检测体系的建立方法，其特征在于：所述Transwell小室的型号规格为12孔、0.4μm孔径、1.12cm²生长面积。

3.根据权利要求1所述的重金属经口生物可及性检测体系的建立方法，其特征在于：所述步骤3）中，所述含重金属的消化液稀释5-15倍后施加于Transwell小室顶侧，所述培养预定时间分别是4，8，12，24h。

4.根据权利要求1所述的重金属经口生物可及性检测体系的建立方法，其特征在于：所述步骤4）中，计算公式为：，为消化液中重金属浓度，为消化液体积，为流质食品或水中重金属浓度，为流质食品或水消化前质量或体积。

5.一种重金属经口毒性检测体系的建立方法，其特征在于：包括权利要求1-4中任一项所述的重金属经口生物可及性检测体系的建立方法，还包括如下步骤：小肠吸收结束后测定人小肠上皮细胞3D模型毒性损伤指标随重金属施加浓度的变化曲线，基于经口生物可及性的结果，评估暴露风险，建立经口暴露重金属浓度与暴露风险的关系曲线。

6.根据权利要求5所述的重金属经口毒性检测体系的建立方法，其特征在于：所述人小肠上皮细胞3D模型毒性损伤指标包括细胞增殖能力、氧化应激以及遗传损伤中的一种或多种。