[发明专利]一种用于检测非洲猪瘟病毒的引物组、荧光可视化快速检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一组用于检测非洲猪瘟病毒的特异性引物组，其特征在于，其包括一对特异性外引物，一对特异性内引物和一条环引物，其特异性外引物的核苷酸序列分别为如SEQ ID NO.1所示的F3和如SEQ ID NO.2所示的B3，所述特异性内引物的核苷酸序列分别为如SEQ IDNO.3所示的FIP和如SEQ ID NO.4所示的BIP，所述环引物的核苷酸序列为如SEQ ID NO.5所示。

2.一种检测非洲猪瘟病毒的LAMP试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的引物组合。

3.一种检测非洲猪瘟病毒的可视化快速检测试剂盒，其特征在于，其包括一对特异性外引物，一对特异性内引物，一条环引物和Bst DNA聚合酶及荧光目视检测试剂，其中，特异性外引物的核苷酸序列分别为如SEQ ID NO.1所示的F3和如SEQ ID NO.2所示的B3，所述特异性内引物的核苷酸序列分别为如SEQ ID NO.3所示的FIP和如SEQ ID NO.4所示的BIP，所述环引物的核苷酸序列为如SEQ ID NO.5所示，所述荧光目视检测试剂为含有Mn²⁺的钙黄绿素溶液。

4.根据权利要求3所述的可视化快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括检测试剂，所述检测试剂包括无DNA酶的蒸馏水、LAMP反应液、阴性质控标准品和阳性质控标准品；所述LAMP反应液中含有所述的一对特异性外引物，一对特异性内引物，一条环引物和Bst DNA聚合酶及荧光目视检测试剂。

5.根据权利要求3所述的可视化快速检测试剂盒，其特征在于，还包括样品快速处理试剂，所述样品快速处理试剂含有聚乙二醇、Triton-X100、EDTA、Ttis-HCl，海藻糖。

6.根据权利要求5所述的可视化快速检测试剂盒，其特征在于，所述样品快速处理试剂为含有质量百分比为2.5％的聚乙二醇，3mg/mL的蛋白酶K，0.1％Triton-X100的DNAExtract Solution A，和含3mmol/LEDTA，1.5mmol/L Ttis-HCl，质量百分比为0.25％的海藻糖的DNA Extract Solution B。

7.一种用于检测非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

S1、从样品中提取DNA；

S2、对步骤S1提取的所述DNA进行等温扩增；其中，在反应体系中，采用如权利要求1所述的引物组，置于63℃恒温反应；

S3、结果判定：50分钟内呈现绿色为阳性，50分钟内呈现橘黄色为阴性。

8.根据权利要求7所述的用于检测非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于，在步骤(1)中，样品中提取DNA采用如下方法进行：将样本拭子上清10μL加入到1.5mL离心管中，加入100μLDNA Extract Solution A，涡旋震荡20s，室温静置3-5min或95℃金属浴孵育3-5min进行裂解，之后再加入100μLDNA Extract Solution B，涡旋震荡30s，获得检测样品DNA；

其中，所述DNA Extract Solution A中含有质量百分比为2.5％的聚乙二醇，3mg/mL的蛋白酶K，0.1％Triton-X100；

所述DNA Extract Solution B含有3mmol/L EDTA，1.5mmol/L Ttis-HCl，质量百分比为0.25％的海藻糖。