[发明专利]一种新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测胶体金层析试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种新型冠状病毒（2019‑nCoV）检测胶体金层析试剂盒及其应用。该试剂盒通过将采集的样本经细胞裂解液裂解后释放病原体核酸，然后在逆转录酶和T7RNA聚合酶的作用下，经逆转录和转录过程，实现病原体核酸片段的扩增。扩增后的RNA产物被检测液中的特异探针识别捕获，形成RNA扩增产物‑‑‑特异探针‑‑‑金探针复合物，该复合物通过侧向流层析在NC膜上被固定形成可见的条带，实现病原体核酸的检测。本发明没有RNA的提取过程，不需要特殊仪器，基于RNA恒温扩增，在实际检测中不易污染，具有灵敏度高、特异性强以及操作简单的优势，使新型冠状病毒（2019‑nCoV）核酸检测得到广泛应用成为一种可能。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒(2019-nCoV) 检测胶体金层析试剂盒及其应用。

背景技术

冠状病毒为不分节段的单股正链RNA病毒，属于巢病毒目(Nidovirales) 冠状病毒科(Coronaviridae)正冠状病毒亚科(Orthocoronavirinae)，根据血清型和基因组特点冠状病毒亚科被分为α、β、γ和δ四个属。已知感染人的冠状病毒有6种，包括α属的229E和NL63，β属的OC43和HKU1、中东呼吸综合征相关冠状病毒(MERSr-CoV)和严重急性呼吸综合征相关冠状病毒 (SARSr-CoV)。新型冠状病毒2019-nCoV为一种属于β属的新型冠状病毒。目前对其理化特性认知相对较少，相关特性认知多来自对SARS-CoV和MERS-CoV 的研究。

截至目前搜集到的新型冠状病毒肺炎(以下简称COVID-19)病例，显示本次疫情以发热、乏力、干咳为主要表现。鼻塞、流涕等上呼吸道症状少见。约半数患者多在一周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。值得注意的是重症、危重症患者病程中可为中低热，甚至无明显发热。部分患者起病症状轻微，可无发热，多在1周后恢复。多数患者预后良好，少数患者病情危重，甚至死亡。

国家卫生健康委和国家中医药管理局发布的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案》在确诊病例符合疑似病例标准的基础上，强调了对核酸的检测。随后1 月11日和12日，国内外专家与世界卫生组织分享新型冠状病毒2019-nCoV全基因组序列。基于国内外专家在GISAID平台上发布的新型冠状病毒2019-nCoV 基因组序列信息，进行相关引物和探针的设计制备新型冠状病毒2019-nCoV核酸快速检测试剂盒，以辅助呼吸道感染性疾病新型冠状病毒的早期鉴别诊断，是十分必要的。目前新型冠状病毒2019-nCoV的检测主要为荧光PCR法，可直接检测核酸，灵敏度高、特异性强，在缩短检测窗口期、提高病原体检出率方面具有相当的优势。但是PCR的方法对硬件设施有一定的要求，要有专门的PCR诊断实验室、昂贵的实验仪器，不利于在一些社区及偏远医院的普及应用。因此，在RNA恒温扩增技术的基础上，结合胶体金层析技术，建立一种操作简单、快速、价格低廉的2019-nCoV的诊断方法具有非常重要的意义。

发明内容

鉴于以上所述疫情防控对于病原体快速检测的需求，本发明的目的在于提供一种基于RNA恒温扩增-金探针层析技术检测新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸的试剂盒及其应用。该试剂盒通过将采集的样本经细胞裂解液裂解后释放病原体核酸，然后在逆转录酶和T7RNA聚合酶的作用下，经过逆转录和转录过程，实现病原体核酸片段的扩增。扩增后的RNA产物被检测液中的特异探针识别捕获，形成RNA扩增产物---特异探针---金探针复合物，该复合物通过侧向流层析在NC 膜上被固定形成可见的条带，实现病原体核酸的检测。因此，本发明没有复杂的 RNA提取过程，也不需要特殊的仪器，基于RNA分子易降解的特点，本发明在实际检测中不易污染，具有灵敏度高、特异性强以及操作简单的优势，对新型冠状病毒(2019-nCoV)能做到快速高效检测，对疫情的蔓延和防治有极大的帮助。

为了实现上述目标，本发明采用如下技术方案：

第一方面，提供一种新型冠状病毒(2019-nCoV)检测胶体金层析试剂盒，所述试剂盒是基于RNA恒温扩增-金探针层析技术，包括：