[发明专利]一种检测叶酸代谢通路相关基因的试剂盒

说明书

本发明提供一种检测叶酸代谢通路相关基因的试剂盒，包括用于检测与叶酸代谢通路相关的MTR基因RS1805087位点、CBS基因RS5742905位点、MTRR基因RS1801394位点、MTHFR基因rs1801131位点和MTHFR基因RS1801133位点的引物组合物，所述引物组合物的序列包括5对PCR引物和5个紧邻SNP位点的正向延伸引组合物，如SEQ ID No:1‑15所示。该试剂盒不仅可以实现一次性的多基因位点检测，而且降低了最低检测限至1ng/ul，检出率高，实现大通量快速地进行基因位点的分型，保证样本检测的准确性100％。

技术领域

本发明涉及基因多态性检测技术领域，特别涉及一种检测叶酸代谢通路相关基因的试剂盒。

背景技术

叶酸是机体所需的重要营养素，为水溶性B族维生素，参与一系列涉及一碳单位转运的重要生化反应。随着医学遗传学、分子生物学等医学科学的不断进步，人们越来越多地认识到叶酸许多新的重要功能，尤其是叶酸缺乏将会导致染色体的损伤、断裂，姊妹染色体交换频率增加，脆性位点表达，严重者可致突变，甚至癌变。叶酸是合成核酸所必须的元素，是细胞生长和组织修复所必备的物质，更是胚胎发育过程中不可缺少的营养素。叶酸的临床功能除了预防胎儿神经管缺陷外，还能降低孕妇妊娠高血压、自发性流产和胎儿宫内发育迟缓、早产以及新生儿低出生体重等的发病率。近年来大量研究已经证实，叶酸缺乏是导致出生缺陷的主要原因。

叶酸的代谢、发挥作用与多种因素有关。叶酸在人体中，经叶酸还原酶作用，还原成具有生理活性的四氢叶酸，后者作为细胞内一碳单位的载体，参与嘌呤和嘧啶合成，并为DNA的甲基化提供甲基。四氢叶酸甲基载体之一的5-甲基四氢叶酸是由甲基四氢叶酸还原酶作用下生成，又作为甲基供体，在甲硫氨酸合成酶催化下，以维生素B12为辅酶，促进血液中同型半胱氨酸再次甲基化而生成蛋氨酸(甲硫氨酸)，以维持正常的血浆同型半胱氨酸水平。同时，甲硫氨酸被ATP磷酸化后形成S-腺苷甲硫氨酸，后者参与了机体内的DNA和蛋白质的甲基化过程，重新生成同型半胱氨酸。因此，5-甲基四氢叶酸是维持血液中同型半胱氨酸水平的重要因素，也是甲基化反应的重要前体。参与调节血浆同型半胱氨酸代谢、影响叶酸代谢通路相关的基因包括：胱硫醚-β-聚合酶(Cystathionineβ-Synthase，CBS)、甲硫氨酸合成酶(methionine synthase,MTR)、甲硫氨酸合成酶还原酶(methionine synthasereductase,MTRR)和5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(methy-lene tetrathydrofolatereductase,MTHFR)。

CBS是体内HCY分解代谢的关键酶，在其催化下与丝氨酸缩合成胱硫醚，进一步代谢为半胱氨酸和α-酮丁酸随尿液排出体外，从而维持体内HCY的代谢正常水平。MTR编码的甲硫氨酸合成酶，催化甲硫氨酸生物合成的最后一步，由进入细胞内的5-甲基四氢叶酸提供甲基，催化HCY再甲基化生成甲硫氨酸，维持体内HCY水平和甲硫氨酸循环。MTHFR编码的四氢叶酸还原酶能将5,10-亚甲基四氢叶酸装变为5-甲基四氢叶酸，从而参与甲硫氨酸代谢循环和DNA甲基化。正常的MTHFR活性能保持叶酸和甲硫氨酸循环的有效性，进而维持体内HCY的正常水平。MTRR基因是甲硫氨酸合成酶的辅助因子，催化甲钴胺再生，维持体内的甲硫氨酸、四氢叶酸及HCY的正常水平。CBS基因、MTR基因、MTHFR基因和MTRR基因变异引起的相应的酶活性降低阻抑同型半胱氨酸转化为甲硫氨酸，导致低叶酸血症和高同型半胱氨酸血症，从而增加孕妇自发性流产或新生儿出生缺陷的风险。

现有对于叶酸代谢通路的相关基因的检测主要仅针对与MTHFR基因和MTRR基因位点的多态性检测，而且现有的检测技术当随着检测位点增多时，容易因其操作复杂，对样本质量要求高，检出率低，实验稳定性和效率低的问题，而难以实现高效、准确地同步检测多个叶酸代谢通路关键基因的多态性位点，从而限制了该检测产品在指导备孕妇女和孕妇合理服用叶酸提供参考依据的有效应用。

发明内容