[发明专利]一种酶结合物稀释液、一种AMH定量检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明提供一种酶结合物稀释液、一种AMH定量检测试剂盒及其使用方法，一种酶结合物稀释液，包括EDTA、酪蛋白、缓冲液、保护蛋白。一种AMH定量检测试剂盒，包括包被有抗AMH单克隆抗体的包被板、含有酶标记的抗AMH单克隆抗体的酶结合物和AMH校准品，所述的酶结合物稀释液与酶标记抗AMH单克隆抗体按体积比为（7800‑8300）:1的比例混合得到酶结合物。在检测过程中消除新旧样本差异的有效成分，降低补体效应带来的新旧样本的差异，另外本发明试剂盒采用一步法反应，减少反应时间和简化操作步骤，实现更方便快捷的操作方法，更灵活和便于操作。

技术领域

本发明属于免疫诊断技术领域，具体涉及一种酶结合物稀释液、一种AMH定量检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

抗缪勒氏管激素(AMH)是转化生长因子β超家族的成员之一，由Professor AlfredJost 首先发现。AMH是由两个相同的70KDa亚基，通过二硫键连接组成的二聚糖蛋白，相对分 子质量为140KDa[1]；人类AMH编码基因位于19号染色体短臂，大小2.4～2.8kb，含有5个外显子。AMH在性腺器官发育过程中起着重要作用，是男女性腺功能的重要标记物之一。男性AMH主要由睾丸间质细胞产生，始于胚胎形成并贯穿生命始终；在男性胎儿的发育过程中，AMH导致缪勒氏管退化，形成正常发育的男性生殖管道。女性的AMH主要由卵巢颗 粒细胞产生，血清AMH水平较低于男性，在青春期后浓度达到高峰，并在整个生育年龄维 持在高水平，之后AMH浓度随着年龄及各种因素逐渐降低，直到绝经后无法测出[2]。

AMH是一种由卵巢小滤泡的颗粒层细胞所分泌的激素，能够反映整个生命周期的卵泡 活性，因此AMH值会随着卵巢功能的变化呈起伏变化。相对于其它指标，AMH水平不受周期内与周期之间的变化影响，值相对稳定，可在月经周期的任何一天进行检测[3]，且不受 激素药物的影响，更便于临床应用。研究表明，AMH可更早更准确反映年龄相关卵巢储备功能的下降，提前预测绝经年龄。因此，AMH是目前预测卵巢反应、评估卵巢储备功能的最理想生物标志物。

目前，临床上用于AMH检测主要采用酶联免疫法、电化学发光法等制备的试剂盒，电化学发光法的缺点是检测成本高，并可能会存在交叉污染潜在问题，并且对环境要求比较 高，酶联免疫法目前存在的缺点是检测时间长、操作步骤复杂。目前国内外酶联免疫法的操 作流程：使用的是固相化的抗AMH抗体，生物素标记的抗AMH抗体，碱性磷酸酶标记的辣根过氧化物酶，形成生物素-碱性磷酸酶在内的双抗体夹心法的“三明治”结构，操作步骤多为三步法或者两步法，操作步骤繁琐，并且AMH检测还存在新旧样本差异的问题。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种酶结合物稀释液、一种AMH定量检测试剂盒及其使用方法，在检测过程中消除新旧样本差异的有效成分，降低补体效应带来的新旧样本的差 异，另外本发明试剂盒采用一步法反应，减少反应时间和简化操作步骤，实现更方便快捷的 操作方法，更灵活和便于操作。

本发明的目的是以下述方式实现的：一种酶结合物稀释液，包括EDTA、酪蛋白、缓冲液、保护蛋白。

所述的酶结合物稀释液，EDTA为EDTA-2K，缓冲液为Tris-NaCl缓冲液或PBS缓 冲液，保护蛋白为小牛血清、牛血清白蛋白、Casein中的至少一种。

所述的酶结合物稀释液，每升酶结合物稀释液中含有EDTA-2K 5.8-7g、酪蛋白7-13g。

所述的酶结合物稀释液，还包括防腐剂。

所述的酶结合物稀释液，防腐剂为Proclin 300、NaN3、卡松中的至少一种。

一种AMH定量检测试剂盒，包括包被有抗AMH单克隆抗体的包被板、含有酶标记 的抗AMH单克隆抗体的酶结合物和AMH校准品，所述的酶结合物稀释液与酶标记抗AMH 单克隆抗体按体积比为(7800-8300):1的比例混合得到酶结合物。