[发明专利]一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，属于生物检测技术领域。所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述的R1包括：表面活性剂A、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、显色剂和缓冲溶液；所述的R2包括：表面活性剂B、过氧化物酶、4‑氨基安替比林、稳定剂和缓冲溶液；通过控制试剂R1中表面活性剂的具体组分以及试剂R2中聚氧乙烯月桂醚和和羟丙基甲基纤维素的浓度比，不仅使试剂盒的灵敏度，准确度显著增加，提高了试剂盒的稳定性，而且该试剂盒中，组分简单易得，制备成本低，有利于临床广泛应用。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用。

背景技术

随着生活水平的提高，人们的血脂水平逐渐升高，血脂异常患病率明显提高。以低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)或血清总胆固醇(serum total cholesterol，TC)升高为特点的血脂异常是动脉粥样硬化性心血管疾病重要的危险因素。近年来发现小而密低密度脂蛋白胆固醇(smalland low densitylipoprotein cholesterol，sd LDL-C)与普通低密度脂蛋白胆固醇相比，更容易被氧化，其致动脉粥样硬化能力更强，为发生冠状动脉粥样硬化性心脏病即冠心病风险因素之一，逐步引起国内外学者的关注。

小而密低密度脂蛋白胆固醇的临床意义在国内外很早就已被发现，早在2007年的中国成人血脂异常防治指南中亦有指出，其作为低密度脂蛋白胆固醇的亚组分之一，更容易导致动脉粥样硬化，但受于方法学限制，使得临床检测并未广泛开展，随着科学的不断发展进步，其临床检测的方法也不断的在更新。

目前针对小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定方法主要有核磁共振光谱法、分子筛色谱法、电子显微镜技术、动态光散射法、微流控芯片毛细管电泳法。其中常用的有：(1)密度梯度超速离心法，是一种扩展型脂质特征测定产品，可报告22种血液胆固醇成分(包括对非空腹LDL亚型及脂蛋白所有子类的直接测定)，是目前国际上小而密低密度脂蛋白胆固醇测定的参考方法。(2)管式凝胶电泳：采用管式聚丙烯酰氨凝胶电泳原理，可完全分离鉴定所有脂蛋白(含7种LDL亚型，10种HDL亚型)。但上述两种检测方法均需要特殊实验设备，并且耗时久，操作复杂，并不适合临床常规检测。(3)过氧化物酶法：在国际上，日本电化生研公司最先推出了适用于临床常规开展的均相酶法，在中国与九强生物和生研技术合作，开发出了过氧化物酶法检测sd LDL-C的方法，在所有临床实验室应用当前设备都可以进行检测，也使得小而密低密度脂蛋白胆固醇作为冠心病的一个标志物将可能具有更广泛的临床实用性。

但是目前在检测过程中普遍存在的问题是试剂盒稳定性差，检测准确度和精密度不高。

例如，中国专利申请201810034866.2中公开了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，由两个独立的试剂R1和试剂R2组成，R1含缓冲液、脂蛋白脂肪酶、非离子表面活性剂、血清白蛋白、肝素钠、镁离子、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶或过氧化物酶、Trinder’s反应剂A、稳定剂、防腐剂；R2含缓冲溶液、非离子表面活性剂、Trinder’s反应剂B、叠氮钠、防腐剂。以试剂1先与标本混合消除SD-LDLC之外的胆固醇，在试剂2加入后针对SD-LDLC反应，Trinder’s反应剂B呈色测定吸光度，计算其含量。但是该申请中使用叠氮钠作为防腐剂会对试剂2中的胆固醇酯酶产生一定程度的抑制作用，因此影响测定的准确度。

又如，中国专利申请201910065449.9中公开一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用，该试剂盒由试剂R1和试剂R2组成；试剂R1包括：表面活性剂a、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、氯化镁和缓冲液；试剂R2包括：表面活性剂b、显色剂、氯化镁和缓冲液，该发明为了提高试剂盒的灵敏度和准确度在试剂R2中加入了松三糖和乳果糖，但是松三糖和乳果糖的价钱相对比较贵，因此会在一定程度上提升试剂盒的成本，导致试剂盒的价钱提高，给病人造成一定的经济压力，因此还需要继续开发价格适中的试剂盒。