[发明专利]靶向RNA的6-甲基腺嘌呤修饰CasRx载体系统及制备方法和应用在审
| 申请号： | 202010184015.3 | 申请日： | 2020-03-16 |
| 公开（公告）号： | CN111440826A | 公开（公告）日： | 2020-07-24 |
| 发明（设计）人： | 纪卫东;应小玲;张海青 | 申请（专利权）人： | 中山大学附属第一医院 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 广州厚海专利商标代理事务所(普通合伙) 44662 | 代理人： | 梁桂萍 |
| 地址： | 510080 *** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 靶向 rna 甲基 嘌呤 修饰 casrx 载体 系统 制备 方法 应用 | ||
1.靶向RNA的6-甲基腺嘌呤修饰CasRx载体系统，其特征在于，所述的载体系统包括失活的CasRx核酸酶融合6-甲基腺嘌呤修饰酶的酶活性功能区的蛋白表达载体、寡核苷酸，以及包括启动子序列、基于靶点序列的gRNA、gRNA支架序列和酶切位点序列的表达载体。
2.根据权利要求1所述的靶向RNA的6-甲基腺嘌呤修饰CasRx载体系统，其特征在于，所述酶切位点序列为5'端带有两个BsmBI酶切位点的gRNA支架序列。
3.根据权利要求1所述的靶向RNA的6-甲基腺嘌呤修饰CasRx载体系统，其特征在于，所述启动子序列为人U6聚合酶III启动子序列。
4.根据权利要求1所述的靶向RNA的6-甲基腺嘌呤修饰CasRx载体系统，其特征在于，基于靶点序列的gRNA的靶点为至少1个的靶点序列。
5.靶向RNA的6-甲基腺嘌呤修饰CasRx载体系统的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：
1)从HUVEC细胞中扩增出METTL3酶活性区域序列，通过PCR扩增、酶切、连接、转化；
2)将METTL3活性区域序列连接至EF1a-dCasRx-2A-EGFP载体，得到失活的CasRx核酸酶融合6-甲基腺嘌呤修饰酶的酶活性功能区的蛋白表达载体；
3)构建包括酶切位点序列和gRNA支架序列的gRNA支架结构；合成基于靶点序列的gRNA；
4)将所述gRNA支架结构和基于靶点序列的gRNA克隆至表达载体中，得到包括启动子序列、基于靶点序列的gRNA、gRNA支架序列和酶切位点序列的表达载体。
6.根据权利要求5所述的靶向RNA的6-甲基腺嘌呤修饰CasRx载体系统的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中的表达载体为CasRx gRNA cloning backbone或Lentiguide-puro载体。
7.根据权利要求1～4任一项所述的载体系统在制备治疗RNA修饰异常引起的疾病的药物中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中山大学附属第一医院，未经中山大学附属第一医院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202010184015.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
