[发明专利]一种基于血痕miRNA的年龄预测方法

说明书

本发明提供了一种基于血痕miRNA的年龄预测方法，属于基因工程技术领域，包括：裂解血痕样本，得到裂解液；将裂解液与氯仿混合、离心，得到水相；将水相与检测外参、异丙醇混合、离心，得到miRNA；将miRNA逆转录为cDNA，将所述cDNA进行荧光定量PCR，计算miRNA的表达量；按照公式年龄＝22.578×log10miR‑374c‑5p表达量‑12.18×log10miR‑32‑3p表达量‑7.268×log10miR‑32‑5p表达量+27.64。本发明检测灵敏度高，仅需要5mm²的血痕即可实现年龄预测，准确度高和分析效率高。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种基于血痕miRNA的年龄预测方法。

背景技术

个体年龄推断是法医物证领域研究的重要组成部分，是决定案件性质和当事人是否承担刑事责任的重要标准。目前针对年龄预测的方法主要以骨龄，牙龄推断为主，但这些方法难以适用于痕量降解物证。同时目前年龄预测范围主要集中在青少年时期，对中老年预测存在一定难度。其他基于表观遗传学的年龄预测方法如DNA甲基化，则存在所需模板量大，使用方法繁琐，如需要做重亚硫酸氢盐转化，导致实验时间长，难以满足公安司法领域快速检测的需求。目前亟需建立更为精准的年龄推断方法。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度为16～22个核苷酸的内源性单链非编码RNA，作为重要的转录因子参与生命活动的调控，与衰老存在密切的相关性。近年来已经报道多种miRNA在衰老过程中发挥重要作用，NorenHooten研究发现美国老年个体的外周血单核细胞中包括mir-103，mir-107，mir-128等多种miRNA表达下调。此外，Elsharawy研究了血样中的80个年龄相关的miRNA位点，同样发现年老个体中16种miRNA表达上调，64种miRNA表达下调，其中mir-103，mir-107的变化趋势与Hooten的结果一致，提示miRNA具有应用于年龄预测的潜力。同时miRNA具有片段小，不易降解的特点，适用于法医学痕量样本的检测。

目前未见到应用血痕miRNA为年龄预测的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于血痕miRNA的年龄预测方法，此用本发明提供的方法灵敏度高、准确度高和分析效率高。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种基于血痕miRNA的年龄预测方法，包括如下步骤：

1)将血痕样本与Trizol试剂混合、震荡裂解，得到裂解液；

所述血痕样本的面积不少于5mm²；

所述血痕样本的面积与Trizol试剂的体积比为1cm²:1ml；

2)将所述步骤1)得到的裂解液静置15min后，与氯仿混合、静置2～3min后进行第一离心，得到水相；

所述第一离心的时间为15min；

3)将所述步骤2)得到的水相与检测外参cel-MiR-39、异丙醇混合，得到混合液，将所述混合液静置10min后进行第二离心，得到miRNA；

所述第二离心的时间为10min；

4)将所述步骤3)得到的miRNA逆转录为cDNA，将所述cDNA进行荧光定量PCR，得到miRNA中miR-374-5p、miR-32-5p和miR-32-3p的Ct值，得到cel-miR-39的Ct值；