[发明专利]一种叶片切片包埋的方法和叶片制片方法

说明书

本发明提供一种叶片切片包埋的方法和叶片制片的方法，属于组织切片技术领域，包埋的方法包括：将固定物卷成桶状，将桶状物竖直放置，将OCT胶置于桶状物内，当OCT胶处于半液体时，将叶片垂直浸没于OCT胶中，当OCT胶完全凝固后，去掉固定物，得到柱形物，实现叶片切片包埋。包埋的方法无需对小麦叶片进行前期处理，而且包埋需要的材料简单。制片的方法包括：采用柱形物，将所述柱形物的一端用OCT胶与样品钉在‑15℃～‑25℃下冷冻8～12min固定，得到冷冻物；将冷冻物在‑20℃～‑24℃下进行切片，得到叶片制片。本发明用OCT胶将柱形物的一端固定并冷冻，增加样品柱与底座的牢固性，保证切片厚度均一。

技术领域

本发明属于组织切片技术领域，尤其涉及一种叶片切片包埋的方法和叶片制片方法。

背景技术

观察叶片中的胼胝质，往往需要对鲜样进行快速切片和制片，防止在切片的过程中对小麦造成的机械伤害，诱导胼胝质含量的增加，增加试验误差。

制作切片所采用的方法可以分为：徒手切片法、石蜡切片法和冷冻切片法。虽然徒手切片不需要前期处理和机械设备，但在切片过程中，切片厚度一般为20-30μm，切片比较厚，而且徒手切片会导致切片厚薄程度不一、材料组织易碎，增加观察切片的难度；石蜡切片前需要进行脱水、透明、透蜡、包埋，切片的周期比较长，程序繁琐，效率低下。因此，现切片一般使用冷冻切片机进行切片。

冷冻切片技术的包埋技术对整个切片的质量至关重要，传统的包埋方法有：一、用厚纸板折成方形，里面铺一层锡箔纸，将样品放入盒子中，加入包埋剂，或者加入包埋剂后添加样品，但锡箔纸很难从从盒内取出；若是不加锡箔纸，等到冷冻后进行剥离纸板，剥离的过程中会因为手指的温度导致OCT胶溶解，增加剥离难度。二、采用两层纸板，其中一层是铜纸，折成方形，上下镂空，用胶将一端固定在底座上，再加入样品和包埋剂，但这种方法在减裁掉盒体时比较麻烦，还要在减裁的过程中修剪包埋角块，且底座的胶体与样品柱上下一般整齐，很容易在后期切片时松动，降低试验效率。此外也有一些新型的包埋盒，类似于针管状，但这种包埋盒很难在切片机箱内的冷冻台上进行冷冻，增加了试验前期的步骤。这些包埋技术虽然在一定程度上提高了切片的质量，但在用时和废材上却存在着一定的瑕疵，影响了工作效率。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种叶片切片包埋的方法和叶片制片方法，采用本发明提供的叶片包埋的方法无需对小麦叶片进行前期处理，而且包埋需要的材料简单。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种叶片切片包埋的方法，包括：

将固定物卷成桶状，得到桶状物，将所述桶状物竖直放置，将OCT胶置于桶状物内，当所述OCT胶处于半液体时，将叶片垂直浸没于OCT胶中，当所述OCT胶完全凝固后，去掉固定物，得到柱形物，实现叶片切片包埋。

优选的，所述固定物包括铝箔纸，所述铝箔纸的长度为4～6cm，所述铝箔纸的宽度为0.8～1.2cm。

优选的，所述桶状物的直径大于叶片的宽度。

优选的，所述叶片的长度在1.2cm以内。

优选的，将所述桶状物竖直放置于载玻片上。

优选的，所述叶片包括小麦的叶片或玉米的叶片。

本发明还提供了一种叶片制片的方法，包括以下步骤：

1)采用上述技术方案所述的方法得到柱形物，将所述柱形物的一端在-15℃～-25℃下冷冻8～12min固定后，得到冷冻物；

2)将所述步骤1)得到的冷冻物在-20℃～-24℃下进行切片，得到叶片制片。

优选的，所述柱形物的一端用OCT胶固定在样品钉上。