[发明专利]一种人呼吸道病原体快速诊断的定量检测方法和试剂盒

权利要求书

1.一种基于流式细胞检测和微量多重蛋白定量检测的人呼吸道病原体快速诊断和定量检测的方法，其特征在于，包括：呼吸道病原体抗体和捕捉微球的共价耦合、检测抗体荧光标记、标准曲线的绘制、待测样品处理及检测、结果分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的样本处理为使用细胞裂解液4度裂解10-20min。

3.一种基于流式细胞检测和微量多重蛋白定量检测的人呼吸道病原体快速诊断及定量检测的试剂盒，包括人呼吸道病原体抗体的一种或多种组合捕捉微球，PE标记的检测抗体试剂（一种或多种组合），标准品蛋白（一种或多种组合），流式细胞仪校准微球，微球缓冲液，样品缓冲液，裂解液，清洗液；其中所述的呼吸道病原体包括呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒( IA )、乙型流感病毒( IB)、腺病毒( Adv )、副流感病毒1型、副流感病毒2型和副流感病毒3 型、偏肺病毒、博卡病毒、冠状病毒、鼻病毒、肠道病毒、支原体或衣原体中的至少一种或多种组合。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于病原体抗体耦合的载体为羧基化的颗粒径为3-7um的聚苯乙烯微球。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于检测抗体的制备为PE荧光素标记的检测抗体，其检测抗体与捕获微球捕获的抗体为配对抗体。

6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于微球缓冲液的制备加入了0.5-3.0%胎牛血清，0.1%-10%的吐温-20，0.05%-0.1%的叠氮化钠。

7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于细胞裂解液的制备：150 mM NaCl 1% NP-40 ，0.1% SDS，2ug/ml Aprotinin，1mM PMSF ，1.5 mM EDTA ，1mM NaVanadate 以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCl溶液中。

8.一种用于制备如权利要求3所述的基于流式细胞检测和微量多重蛋白定量检测的人呼吸道病原体快速诊断及定量检测的试剂盒，其特征在于：病原体抗体的捕捉微球制备、检测抗体的荧光标记、微球缓冲液的制备、细胞裂解液的制备和清洗液的制备。