[发明专利]用于产生和纯化来自溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的胶原酶的新方法

权利要求书

1.来自溶藻弧菌解毒化学变型的纯化的具有SEQ ID NO:1序列的胶原酶，特征在于：

分子量为82Kda；

比活在1000和1800nkat/mg之间；

纯度在98.0和100％之间；

无微生物或蛋白质污染物；

在5.5和11之间的pH下稳定；

在4℃和40℃之间的温度下在水溶液中稳定；

在4℃下在水溶液中稳定30天；

在-20℃和-80℃之间的温度下在水溶液中稳定24-48个月；

获得稳定的亲液粉末的亲液性(lyophilisability)。

2.权利要求1的纯化的胶原酶，其中所述胶原酶在pH 7.1下在包含25mM TRIS-HCl和10mM CaCl₂的水溶液中稳定。

3.权利要求1的纯化的胶原酶，其中所述胶原酶在37℃稳定。

4.权利要求1的纯化的胶原酶，其中所述胶原酶处于具有7-20nkat/mg粉末范围内的酶活性的稳定亲液粉末的形式，其包含：

麦芽糖：95-96％，优选95.75％；

盐：1.0-1.5％，优选1.3％；

胶原酶：2.5-3.5％，优选2.95％。

5.权利要求1-4中任一项的纯化的胶原酶，其用于治疗不同程度的烧伤、褥疮、烫伤、多种来源的皮肤溃疡、血管性和糖尿病性溃疡、蜂窝织炎、手术后粘连、肥大性瘢痕和瘢痕疙瘩。

6.权利要求1-4中任一项的纯化的胶原酶，其用于治疗粘连性囊炎、掌挛缩病和纤维性海绵体炎。

7.用于局部用途的药物组合物，其处于扑粉的形式，其包含：

权利要求1-4中任一项的纯化的胶原酶，其量等同于成品的2和8nkat/g之间的活性范围的量，优选量等同于成品的5nkat/g活性的量；

羟乙酸玉米淀粉，其量为达到百分比组成所需的量；

重量平均分子量在130和230kDa之间，优选145和210kDa之间、甚至更优选160和200kDa之间的透明质酸，其量在0.1和5％之间，优选量在0.2和2％之间；

可选地，胶态二氧化硅，其量在0.1和3％之间，优选量在0.2和1％之间。

8.可注射药物组合物，其每个单位剂量包含：

冻干形式的权利要求1-4中任一项的纯化的胶原酶，其量为等同于120和450nkat之间的活性的量；

无菌盐溶液；

重量平均分子量在750和1200kDa之间的透明质酸，其浓度为1和30mg/ml盐溶液之间，优选浓度为8和20mg/ml之间、甚至更优选浓度为10和15mg/ml之间。

9.权利要求7的药物组合物，其用于不同程度的烧伤、烫伤、褥疮、血管性和糖尿病性溃疡、蜂窝织炎、手术后粘连、肥大性瘢痕和瘢痕疙瘩的外部和/或局部治疗。

10.权利要求8的药物组合物，其用于治疗粘连性囊炎、掌挛缩病和纤维性海绵体炎。