[发明专利]一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒及其制备使用方法

说明书

本发明提供了一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP‑3的试剂盒，包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2；反应缓冲液R1包括缓冲液、无机盐、增浊剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂；胶乳试剂R2包括至少两种通过MMP‑3与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液，每种组成液之间的混合比例为1:1；此外，每种胶乳试剂组成液还分别包括胶乳保存液以及保存在胶乳保存液中的胶乳微球，胶乳保存液包括缓冲液、无机盐、稳定剂、防腐剂、表面活性剂。本发明还提供了一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP‑3的试剂盒的制备使用方法。本发明试剂盒线性范围可达到1600ng/mL，并且具有很好的灵敏度、特异性及准确度，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物检测试剂制备领域，尤其涉及一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒及其制备使用方法。

背景技术

基质金属蛋白酶3(MMP-3)是由关节滑膜细胞、纤维母细胞、巨噬细胞等产生的一种蛋白质分解酶。MMP-3因可分解蛋白多糖、各种胶原蛋白、层粘连蛋白、纤连蛋白而被认为与关节破坏有着密切的关系。在风湿性关节炎患者的滑膜组织中发现MMP-3过剩表达，患者血液中的浓度可反映其风湿性关节炎的活动性。

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以对称性、多关节炎症为主要表现的慢性、全身性自身免疫性疾病。RA的靶器官主要是关节滑膜，病理改变是慢性滑膜炎，出现滑膜炎症、增厚、血管翳形成、软骨及软骨下骨质破坏，终导致关节畸形及强直而致残。其中，软骨和骨的进行性、不可逆性破坏是一个不可忽视的特点，造成RA关节破坏的发病机制目前尚未完全阐明。新近研究表明，基质金属蛋白酶3(matrixmetalloproteinase-3，MMP-3)的高表达及在滑膜、软骨和软骨下骨的细胞外间质的降解中均发挥着重要作用。

2000年左右，国际医学界研究发现，RA增生的滑膜细胞及软骨细胞在多种细胞因子激活下分泌产生的基质降解酶(如基质金属蛋白酶、组织蛋白酶)是软骨降解、破坏的重要原因之一。MMP-3是RA早期疾病活动的一个重要预测因子，是导致软骨降解的最重要的蛋白酶，是系统性的炎症标志物，可作为类风湿关节炎患者滑膜损害和预后的指标。

首先实现MMP-3浓度测定的是酶联免疫法，将具有免疫活性的MMP-3单抗结合到固相载体表面，利用具有抗体免疫活性、同时也具有酶活性的酶标抗体，与结合在固相载体表面的MMP-3单抗结合，加底物后，酶标抗体的酶催化底物成为有色产物，结合在固相载体上的酶量与标本中MMP-3的量成一定的比例，产物的量与标本中MMP-3的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅对 MMP-3进行定量。但该法对仪器条件要求高，常规应用有困难，也不适用自动化检测。基于分光光度计检测的生化试剂盒的研发也受到各国体外诊断试剂企业关注。免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法，其基本原理是：样本加入到试剂中以后，其中的MMP-3和试剂中包被了抗人MMP-3抗体的胶乳颗粒发生抗原-抗体的特异性结合反应，产生浑浊现象，其浊度与样本中MMP-3浓度成正比。使用光学方法测定浊度，便可计算出样本中MMP-3浓度。然而，目前的基于免疫比浊法的的MMP-3测定试剂盒在线性范围、灵敏度、特异性与准确度上仍表现出了一定的不足，不能完全满足临床需求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种线性范围宽、灵敏度特异性好、准确度高的基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒及其制备使用方法。

本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：

一种基于胶乳增强免疫比浊法测定MMP-3的试剂盒，包括反应缓冲液R1 和胶乳试剂R2；

所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为：缓冲液5-10g/L，无机盐6-17 g/L，增浊剂10-30g/L，防腐剂1-3mL/L，稳定剂20-35g/L，表面活性剂0.5-2.5 mL/L，溶剂为纯化水；