[发明专利]重组谷氨酸棒杆菌及生产L-苏氨酸的方法

权利要求书

1.重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，其lysC、hom、thrB和thrC基因被强化，且pck和/或pyk基因的表达被弱化。

2.根据权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，

所述lysC基因的强化包括I）~III）中至少一种：

I）在lysC基因编码区上游插入sod启动子；

II）将lysC基因的起始密码子由GTG突变为ATG；

III）lysC基因突变为如SEQ ID NO:3所示，使其编码蛋白的N端第311位的苏氨酸突变为异亮氨酸；

所述hom基因的强化包括I）~II）中至少一种：

I）在hom基因编码区上游插入cspB的启动子；

II）hom基因突变为如SEQ ID NO:5所示，使其编码蛋白的378位的甘氨酸突变为谷氨酸；

所述thrB基因的强化为增加thrB基因的拷贝数；

所述thrC基因的强化包括I）~II）中至少一种：

I）在thrC基因编码区上游插入sod启动子；

II）thrC基因的起始密码子由GTG突变为ATG。

3.根据权利要求1或2所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，

所述pck基因的弱化包括包括I）~III）中至少一种：

I）将pck基因的启动子替换为cg3069；

II）敲除pck基因；

III）插入片段，使pck基因失活；

所述pyk基因的弱化包括I）~II）中至少一种：

I）将pyk基因的启动子替换为cg3069；

II）敲除pyk基因。

4.根据权利要求1~3任一项所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，其起始菌株为Corynebacterium glutamicum ATCC13032。

5.根据权利要求4所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，其基因型为：ATCC13032,P_sod-lysC^V1M-T311I,P_cspB-hom^G378EthrB,P_sod-thrC^V1M,△pck,△pyk。

6.权利要求1~5任一项所述的重组谷氨酸棒杆菌在制备L-苏氨酸中的应用。

7.权利要求1~5任一项所述的重组谷氨酸棒杆菌的构建方法，包括将P_sod-lysC^V1M-T311I,P_cspB-hom^G378EthrB,P_sod-thrC^V1M整合入谷氨酸棒杆菌的基因组。

8.权利要求7所述的构建方法，其特征在于，还包括弱化pck基因和/或pyk基因的表达；然后增加P_sod-lysC^V1M-T311I,P_cspB-hom^G378EthrB,P_sod-thrC^V1M的拷贝数。

9.L-苏氨酸的制备方法，包括：发酵权利要求1~6任一项所述的重组谷氨酸棒杆菌，获得含有L-苏氨酸的发酵液。