[发明专利]小檗碱介导的UHRF1基因抑制及其在制备治疗多发性骨髓瘤药物中的用途

说明书

本发明公开了小檗碱介导的UHRF1基因抑制及其在制备治疗多发性骨髓瘤药物中的用途，UHRF1‑siRNA序列如下：正义链：gagagcgagagaaggagaacagcaatt；反义链：uugcuguucuccuucucucgcucuctt。所述的UHRF1‑siRNA和/或与所述UHRF1‑siRNA相关的生物材料可以用于制备治疗多发性骨髓瘤药物。本发明揭示了小檗碱体内体外抗多发性骨髓瘤的作用机制，利用SPR‑LC‑MS/MS、分子模拟对接等新技术筛选到了小檗碱在多发性骨髓瘤中的潜在靶点UHRF1；并据此设计了相应的siRNA，达到了抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖能力和克隆形成能力的治疗目的。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及小檗碱介导的UHRF1基因抑制及其在制备治疗多发性骨髓瘤药物中的用途。

背景技术

多发性骨髓瘤(Multiple myeloma，MM)是一种造血系统的恶性肿瘤，其表现为骨髓内浆细胞克隆性增生并伴随免疫球蛋白M蛋白生成。随着MM分子生物学性质的阐明以及对骨髓瘤细胞内信号转导、骨髓瘤微环境的深入研究，越来越多的靶向骨髓瘤及微环境的新型药物逐渐用于临床药物治疗，如蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂、单克隆抗体药物等，使得MM治疗取得了较大进展。但大多数可用药物容易产生毒副作用和耐药性，MM仍为不可治愈性恶性肿瘤，需要开发新的药物治疗MM。

MM的发病过程中表现出热毒的证型，可用清热解毒法进行治疗。黄连解毒汤(Huang Lian Jie Du Tang,HLJDT)，方中有黄连、黄芩、黄柏、栀子四味药物，全方具有泻火解毒之功效，是中医清热解毒方的经典方剂。HLJDT抗炎机制是通过抑制白介素-6(Interleukin 6,IL-6)分泌，IL-6在MM发生发展中起着重要作用，HLJDT在临床治疗MM患者中已取得一定疗效。

黄连素，又称小檗碱(berberine,BBR)，是HLJDT君药(黄连)的主要成分，可从黄连、黄柏、血红小檗等植物的根茎中通过分离提取出来天然生物碱。BBR具有广泛抗菌谱，在临床上常用于治疗痢疾和肠炎。

BBR在体外可以有效地抑制MM细胞增殖，且能抑制细胞因子IL-6的分泌。这表明BBR具有抗MM作用，但其分子作用机制和具体作用靶蛋白尚未得到阐明。

发明内容

本发明的首要目的是在探究小檗碱治疗多发性骨髓瘤的分子作用机制，以及在确定小檗碱治疗多发性骨髓瘤的具体作用靶蛋白的基础上，提出了一种抑制UHRF1基因表达的siRNA，命名为UHRF1-siRNA。

本发明的另一目的在于提供上述的UHRF1-siRNA在制备治疗多发性骨髓瘤药物中的用途。

本发明是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识做出的：

本发明以SPR-LC-MS/MS(表面等离子共振、液相色谱和蛋白质质谱联用)技术筛选到小檗碱在MM细胞(RPMI-8266和MM.1S)中的81个潜在靶蛋白，分子模拟对接发现其中的UHRF1是BBR抗MM的重要靶标并且有三个潜在的结合位点，3个结合位点均位于UHRF1的TTD-PHD结构域上；再以SPR(表面等离子共振)实验验证BBR是通过第三个结合位点与UHRF1蛋白发生相互作用的。

接着本发明纯化UHRF1及其相关结构域，进行SPR实验验证BBR能与UHRF1的TTD-PHD结构域发生相互作用。

同时发现，UHRF1高表达于MM原代细胞和MM细胞，低表达于正常的hPBMCs(人外周血单个核细胞)；且UHRF1高表达提示着MM患者不良预后；BBR处理后能显著下调UHRF1蛋白表达水平，但并没有对UHRF1-mRNA表达水平产生影响；BBR诱导UHRF1蛋白经泛素-蛋白酶体途径降解。

UHRF1在MM中起到一个癌基因作用，UHRF1-siRNA靶向抑制UHRF1表达后，MM细胞增殖能力、克隆形成能力和BBR药物敏感性下降，提示UHRF1-siRNA可以用于制备治疗多发性骨髓瘤的药物。