[发明专利]一种肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的检测方法

说明书

本发明公开了细菌检测技术领域的一种肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的检测方法，肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体包括以下三对引物：肺炎军团菌的检测引物如下：上游引物：5’‑AGGGTTGATAGGTTAAGAGC‑3’下游引物：5’‑ABGGTCAGATAATACTGGTTGAC‑3’；脑膜炎奈瑟菌的检测引物如下：上游引物：5’‑GCTGGCGCCGCTGGCAACAAAATTC‑3’下游引物：5’‑CTTCTGCAGATTGCGGCGTGCCGT‑3’；肺炎支原体的检测引物如下：上游引物：5’‑GAAGCTTATGGTACAGGTTGG‑3’下游引物：5’‑ATTACCATCCTTTCTTGTAAGG‑3’；该三种细菌的检测采用的是全基因合成的方法，将肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的保守序列构建到pJET1.2载体中，再转化到DH5a感受态中，挑取单菌落摇菌，作为标准品进行后续PCR检测实验，从而提高了细菌的检测准确性。

技术领域

本发明涉及细菌检测技术领域，具体为一种肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的检测方法。

背景技术

军团菌病是由革兰染色阴性的嗜肺军团杆菌引起的一种以肺炎为主的全身性疾病，1976年被确认。嗜肺军团菌是引起军团菌肺炎最重要的一种。军团菌存在于水和土壤中，常经供水系统、空调和雾化吸入而被吸入，引起呼吸道感染，亦可呈小的暴发流行。

脑膜炎双球菌(学名Neisseria meningitidis)，又名脑膜炎奈瑟菌或脑脊髓膜炎双球菌，简称为脑膜炎球菌，是一种革兰氏阴性菌，因其所导致的脑膜炎而闻名，亦会造成脑膜炎球菌血症(一种致命性的败血症)。它只感染人类，并无寄生的动物，是唯一令细菌性感染脑膜炎成为流行病的病菌。

支原体肺炎患者虽然自感症状较重，但胸部体检一般无明显异常体征。鼻部轻度鼻塞、流涕，咽中度充血。耳鼓膜常有充血，约15％有鼓膜炎。颈淋巴结可肿大。约10％～15％病例发生少量胸腔积液。除呼吸系统的表现外，支原体肺炎可伴发多系统、多器官损害。皮肤损害可表现为斑丘疹、结节性红斑、水疱疹等。胃肠道系统可见呕吐、腹泻和肝功损害。

现有的肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的序列构建存在严重的问题就是在转化时缺少DH5a，从而不能够作为标准品使用，为此我们提出一种肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的检测方法，以解决上述背景技术中提出的肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的序列构建在转化时缺少DH5a，从而不能够作为标准品使用的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的检测方法，肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体包括以下三对引物：

肺炎军团菌的检测引物如下：

上游引物：5’-AGGGTTGATAGGTTAAGAGC-3’

下游引物：5’-ABGGTCAGATAATACTGGTTGAC-3’；

构建到载体中的序列