[发明专利]一种肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的检测方法在审
| 申请号： | 202010116898.4 | 申请日： | 2020-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN111424100A | 公开（公告）日： | 2020-07-17 |
| 发明（设计）人： | 彭海东;郑文涛;李硙梓 | 申请（专利权）人： | 宁波明舟生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 315000 浙江省宁波市高新区光华路299弄*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肺炎 军团 脑膜炎 奈瑟菌 支原体 检测 方法 | ||
1.一种肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的检测方法，其特征在于：肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体包括以下三对引物：
肺炎军团菌的检测引物如下：
上游引物：5’-AGGGTTGATAGGTTAAGAGC-3’
下游引物：5’-ABGGTCAGATAATACTGGTTGAC-3’；
脑膜炎奈瑟菌的检测引物如下：
上游引物：5’-GCTGGCGCCGCTGGCAACAAAATTC-3’
下游引物：5’-CTTCTGCAGATTGCGGCGTGCCGT-3’；
肺炎支原体的检测引物如下：
上游引物：5’-GAAGCTTATGGTACAGGTTGG-3’
下游引物：5’-ATTACCATCCTTTCTTGTAAGG-3’。
2.根据权利要求1所述的一种肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的检测方法，其特征在于：PCR反应体系如下：0.2ul FastTaq DNA polymerase(2U/ul)，1ul DTT(100mM)，2.5ul 10*PCR buffer(Mg2+free)，3ul MgCl2(25mM)，1ul dNTP(10mM)，2ul LP-Fi(10uM)，2ul LP-Ri(10uM)，1ul Nme-Fi(10uM)，1ul Nme-Ri(10uM)，2ul MPN-Fi(10uM)，2ul MPN-Ri(10uM)，0.2ul Eva Green，Water补足至25ul。
3.根据权利要求1所述的一种肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的检测方法，其特征在于：PCR反应程序如下：94℃预变性3min；94℃变性15s；60℃，退火20s；72℃延伸15s；反应40个循环；72℃延伸5min。
4.根据权利要求1所述的一种肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的检测方法，其特征在于：步骤如下：基因序列的QC：对所需合成的基因全序列进行分析，检查基因内部是否含有复杂二级结构和重复序列；根据序列的具体情况设计合成方案；根据基因序列分析的结果，进行单链oligo的设计及合成；利用PCR将合成的oligo拼接成完整的基因；将肺炎军团菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎支原体的保守序列构装入pJET1.2载体并转化至感受态细胞DH5α。
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