[发明专利]一种BAX PCR方法在食品沙门氏菌检测中的应用

说明书

本发明涉及一种BAX PCR方法在食品沙门氏菌检测中的应用；步骤一、将样品置于增菌液中制成初始悬液；步骤二、在步骤一中提取的增菌液添加到脑心浸液肉汤中，进行第二次增菌再培养；步骤三、将步骤二中经第二次增菌再培养的增菌液加入裂解管内，在裂解管中加入含有蛋白酶的裂解液，并将裂解管在加热管中进行加热，裂解管在冷却块中冷却后取裂解产物置于PCR反应管中；步骤四、将步骤三中的PCR反应管进行上机检测；本发明提供的一种应用于食品中的沙门氏菌检测，从而快速地进行大批量样本的沙门氏菌检测的BAX PCR方法在食品沙门氏菌检测中的应用。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，尤其涉及一种BAX PCR方法在食品沙门氏菌检测中的应用。

背景技术

沙门氏菌是一群寄生于人和动物肠道内的革兰氏阴性，兼性厌氧杆菌。该菌属的抗原类型非常复杂，据报道目前全世界范围内共有2500多种血清型，我国出现的血清型有220余种。作为一种常见的食源性致病菌，其污染蛋类、畜禽肉、生鲜奶等多数动物源性食品的情况非常普遍，也广泛存在自然环境中，也是引发食源性细菌性疾病的首要致病菌。欧洲每年有十几万人感染沙门氏菌，美国每年有一百多万感染沙门氏菌，而在我国70％-80％的细菌性食物中毒事件是由沙门氏菌引起的，因此早在20世纪80年代，沙门氏菌的感染问题就引起了国内外食品领域专家的高度重视，并制定了相应的监控限量标准，无论是欧盟标准还是我国标准(GB29921-2013食品安全国家标准食品中致病菌限量)，均明确给出：沙门氏菌检测采用三级采样法，任何情况下不得检出。

传统的沙门氏菌检验方法主要是采用选择性培养基和生化反应特性来检测，周期长、过程繁琐、敏感性低，很难满足食品卫生检验的快速需求。存在以下缺陷：1)传统方法需要至少6种分离培养培养基、近10种鉴定试剂以及昂贵的鉴定板条；2)沙门抗原类型的复杂性，生化特性的多样性，鉴定结果的判断难度较大，需要经验非常丰富的实验人员才能很好地把控；3)食品基质种类甚多，基质抑制影响层出不穷，传统方法的敏感性很难满足；4)新型选择性显色培养基中均含有高强抑菌物质，长期接触对人体有一定伤害；5)食品安全越发被重视，检测要求不断加强，对于大批量样本以及大体积取样量的需求越来越多，传统方法很难高效满足。

近年来，科研工作者致力于沙门氏菌检测新技术的开发，取得了很大的进展由费时费力的传统分离培养方法到免疫学检测方法，再到分子生物学检测技术取得了显著的成果，本申请的目的旨在提供一种检测效率高的BAX PCR方法在食品沙门氏菌检测中的应用。

发明内容

本发明目的在于提供了一种快速实时荧光定量的PCR检测技术，应用于食品中的沙门氏菌检测，从而快速地进行大批量样本的沙门氏菌检测的BAX PCR 方法在食品沙门氏菌检测中的应用。

为了实现上述目的，本发明提供了一种BAX PCR方法在食品沙门氏菌检测中的应用，包括以下步骤：

步骤一、将样品置于增菌液中制成初始悬液；

步骤二、在步骤一中提取的增菌液添加到脑心浸液肉汤中，进行第二次增菌再培养；

步骤三、将步骤二中经第二次增菌再培养的增菌液加入裂解管内，在裂解管中加入含有蛋白酶的裂解液，并将裂解管在加热管中进行加热，裂解管在冷却块中冷却后取裂解产物置于PCR反应管中；

步骤四、将步骤三中的PCR反应管进行上机检测。

进一步的，所述步骤一中的增菌液包括BPW/乳糖肉汤/胰酪胨大豆肉汤中的一种或者多种。

进一步的，所述步骤二中的第二次增菌再培养是在37℃下培养3小时。

进一步的，所述步骤三中的裂解管依次在37℃和95℃的加热板中进行加热。

更进一步的，所述步骤三中的裂解管在37℃的加热板中加热20分钟。