[发明专利]一种用于治疗肺纤维化的血小板源性生长因子重组疫苗及其应用

说明书

本发明公开了一种用于治疗肺纤维化的血小板源性生长因子(PDGF)重组疫苗，将PDGF的抗原表位(aa72‑87,QVRKIEIVRKKPIFKK)插入激烈火球菌硫氧还原蛋白(PfTrx)的原核质粒pET28‑PfTrx中，表达纯化重组疫苗PfTrx‑PDGF¹⁶(72‑87)，该重组疫苗可以成功刺激机体产生高效价的抗PDGF中和性抗体，明显减轻经博莱霉素(BLM)诱导后产生的小鼠肺纤维化。PfTrx‑PDGF¹⁶(72‑87)重组疫苗免疫可以明显减轻博莱霉素气管灌注后急性期肺组织的炎症反应，抑制小鼠肺脏胶原生成以及细胞基质的增多、沉积；同时还可以降低小鼠肺组织的TGF‑β1、CTGF、α‑SMA、Col1a2、Col3a1的表达水平，这些特点都极有利于减缓肺纤维化的进程。

技术领域

本发明属于肺纤维化治疗药物领域，具体涉及一种用于治疗肺纤维化的血小板源性生长因子重组疫苗及其应用。

背景技术

肺纤维化(或称肺间质纤维化，pulmonary fibrosis,PF)是以成纤维细胞增殖及大量细胞外基质聚集并伴炎症损伤、组织结构破坏为特征的一大类肺疾病的终末期改变，其病程多呈慢性进展。PF的病因常见的有环境、职业、物理和化学因素等，例如石棉、粉尘、药物、放射损伤、有害气体吸入等。一些免疫性疾病如系统性红斑狼疮、干燥综合征、皮肌炎、硬皮病等也可伴发PF。PF多在40-50岁发病，多为散发，男性稍多于女性，估计发病率3～5人/10万，且近年来发病率呈明显上升趋势。大部分PF无有效的病因治疗，患者的5年生存率仅为30％-50％，非药物治疗手段包括氧疗、机械通气、肺移植等。目前新型的用于治疗特发性肺纤维化的药物吡非尼酮(Pirfenidone)及尼达尼布(Nintedanib)，价格高，并且只对部分人群有效。故探索更有效，经济的抗肺纤维化药物是目前医学研究领域面临的重要课题。

血小板源性生长因子(Platelet-derived growth factor，PDGF)是30多年前从人的血小板中分离出来的肽类生长因子，该家族由PDGFA、B、C、D四个成员组成，通过二硫键的连接形成同型或异型二聚体，从而产生五种形式，即PDGF-AA、-AB、-BB、-CC和-DD。其中，PDGF-BB是唯一能与三种PDGF受体PDGF-Rαα、PDGFRαβ及PDGFRββ均可结合的分子，也是目前与配体特异性结合位点研究最为清楚的分子，在纤维化及癌症中发挥重要作用。很多新型的分子靶向药物作用机制包括抑制PDGF受体(PDGFR)，如治疗慢性粒细胞白血病的甲硫酸伊马替尼(Imatinib)、达沙替尼(Dasatinib)及尼洛替尼(Nilotinib)；用于胃肠道基质肿瘤和转移性肾细胞癌的舒尼替尼(Sunitinib)及索拉非(Sorafenib)。而用于治疗肺纤维化的新药吡非尼酮(Pirfenidone)，则能减少炎症细胞积聚，抑制成纤维细胞受到如转化生长因子β(TGF-β)和PDGF刺激后引起的细胞增殖、纤维化相关蛋白和细胞因子产生以及细胞外基质的合成和积聚。尼达尼布(Nintedanib)是一种小分子酪氨酸激酶抑制剂，可抑制多种受体酪氨酸激酶(RTK)，包括血小板衍生生长因子受体α和β(PDGFRα、β)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)，发挥抗纤维化和抗炎作用。由此可见，PDGF在肺纤维化的发生发展过程中起重要的作用，抑制PDGF的作用可以起到拮抗肺纤维化的作用。

细胞因子是指由多种免疫细胞产生的一种具有高活性、多功能的小分子物质，在维持生命活动中发挥重要作用。然而，在疾病病理过程，某些细胞因子的异常表达及活化却促进了疾病的发生发展。因此，阻断或拮抗病理情况下高度表达的细胞因子，是近年来在疾病诊疗过程中的又一重要手段，最为著名的就是治疗类风湿性关节炎的生物制剂TNF-α拮抗剂。然而，现有的生物制剂多为通过基因工程手段表达的针对细胞因子的单克隆抗体或者可溶性受体，属于被动免疫，存在过敏的可能，费用高，需多次使用等一系列问题，因此抗细胞因子疫苗应运而生。