[发明专利]多巴胺修饰的明胶微球、制备方法及其在作为细胞微载体方面的应用

权利要求书

1.一种多巴胺修饰的明胶微球的制备方法，其步骤如下：

(1)4-(二甲氨基)吡啶与甲基丙烯酸甘油酯修饰的明胶预聚体的制备：将8～15g明胶与1～2g的4-(二甲氨基)吡啶溶于40～60℃、80～150mL的二甲基亚砜中，待充分溶解后，在N₂保护的环境下向其中加入3～5mL的甲基丙烯酸缩水甘油酯，反应60～80小时后取出倒入渗析带，在30～50℃下去离子水渗析2～4天，将得到的渗析液冻干后放入-90～-70℃环境保存，得到4-(二甲氨基)吡啶与甲基丙烯酸甘油酯修饰的明胶预聚体；

(2)微流体液滴芯片制备：微流体液滴芯片经基片处理、旋涂光刻胶、紫外掩模版曝光、等离子刻蚀、聚二甲基硅氧烷翻模、孔道键合步骤制备得到；孔道结构由水相入口及水相输运孔道、油相入口及两条对称分布在水相输运孔道两侧、距离水相输运孔道最大平行距离为6～8mm的油相输运孔道、液滴出口及液滴输运孔道三部分组成，其中水相入口与油相入口距离为8～10mm，水相入口与液滴出口距离为2～3cm，单条油相输运孔道与水相输运孔道交叉处的夹角为60°，油相入口、水相入口和液滴出口在同一直线上，孔道高度为50～100μm；水相输运孔道为宽度100～200μm，长度6～8mm的直线型孔道；油相输运孔道为宽度100～200μm，长度2～3cm的折线型孔道；液滴输运孔道为宽度300～500μm，长度3～4cm的正弦曲线型孔道；

(3)将步骤(1)所获得的明胶预聚体与光引发剂2959溶于磷酸缓冲溶液(PBS)中，质量分数分别为5～10％与0.5～1％，作为水相从微流体液滴芯片的水相入口通入，流速为200μL～1000μL/h；将油相从油相入口通入，流速为400μL/h～2000μL/h；液体通入后，水相与油相在孔道交叉处相遇进而发生微乳化，水相被油相切割形成微米级液滴，经液滴输运孔道由液滴出口流出，得到明胶预聚体微球；

(4)将步骤(3)得到的明胶预聚体微球经紫外光灯曝光3min～5min后，依次经矿物油、含有TWEEN 20的PBS溶液、PBS溶液清洗，然后加入到多巴胺的Tri-HCl缓冲溶液中浸泡12h～72h，取出后再经PBS溶液充分清洗后，得到多巴胺修饰的明胶微球，进而用于细胞接种。

2.如权利要求1所述的一种多巴胺修饰的明胶微球的制备方法，其特征在于：步骤(1)所使用的明胶为猪皮明胶或鱼皮明胶，所使用的渗析带材质为纤维素，截留分子量为8000～15000Da。

3.如权利要求1所述的一种多巴胺修饰的明胶微球的制备方法，其特征在于：步骤(2)中光刻胶为AZ5214、BP212-37s或BP212-45，显影液为光刻胶配套显影液；紫外曝光灯波长为365nm，功率为30～100w。

4.如权利要求1所述的一种多巴胺修饰的明胶微球的制备方法，其特征在于：步骤(2)中等离子体刻蚀的刻蚀气压为6mTorr，刻蚀温度10℃，刻蚀功率为RF为50W，ICP为100W，刻蚀时间为2～3min，刻蚀深度为100～150μm；使用的刻蚀气体为氧气、三氟甲烷/六氟化硫、三氟甲烷/氩气之一。

5.如权利要求1所述的一种多巴胺修饰的明胶微球的制备方法，其特征在于：步骤(3)中油相是加SPAN80的矿物油，SPAN80的质量分数为10％～20％；或是加卵 磷脂的玉米油，卵磷脂的质量分数为1.5～3.0％。

6.如权利要求1所述的一种多巴胺修饰的明胶微球的制备方法，其特征在于：步骤(4)中球清洗过程中全程无菌，球清洗过程中，用细胞筛网冲洗或用离心的方式清洗。

7.如权利要求1所述的一种多巴胺修饰的明胶微球的制备方法，其特征在于：步骤(4)中接种的细胞是神经元细胞、胚胎干细胞或神经干细胞。

8.如权利要求1所述的一种多巴胺修饰的明胶微球的制备方法，其特征在于：步骤(4)多巴胺的Tris-HCl缓冲溶液中，多巴胺的质量分数为2～4mg/mL，Tris-HCl缓冲溶液浓度为10～100mM。