[发明专利]一种微生物发酵菌剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种微生物发酵菌剂，其特征在于，包括干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、哈伯氏乳杆菌(Lactobacillus harbinensis)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)。

2.根据权利要求1所述的一种微生物发酵菌剂，所述微生物发酵菌剂中各活菌的总活菌数为2.4×10⁹CFU/mL以上。

3.根据权利要求1所述的一种微生物发酵菌剂，其特征在于，还包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

4.根据权利要求3所述的一种微生物发酵菌剂，其特征在于，所述微生物发酵菌剂的总活菌数为2.8×10⁹CFU/mL以上。

5.根据权利要求3所述的一种微生物发酵菌剂，其特征在于，还包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

6.根据权利要求5所述的一种微生物发酵菌剂，其特征在于，所述微生物发酵菌剂的总活菌数为3.8×10⁹CFU/mL以上。

7.根据权利要求5所述的一种微生物发酵菌剂，其特征在于，

所述干酪乳杆菌为干酪乳杆菌QH16，干酪乳杆菌QH16的16SrDNA在Genbank的登陆号为MN809276，

所述哈伯氏乳杆菌为哈伯氏乳杆菌QH21，哈伯氏乳杆菌QH21的16SrDNA在Genbank的登陆号为MN809279，

所述屎肠球菌为屎肠球菌QH19，屎肠球菌QH19的16SrDNA在Genbank的登陆号为MN809277，

所述酿酒酵母包括酿酒酵母QH1、酿酒酵母QH2和酿酒酵母QH8，酿酒酵母QH1的18SrDNA在Genbank的登陆号为MN759772，酿酒酵母QH2的18SrDNA在Genbank的登陆号为MN759439，酿酒酵母QH8的18SrDNA在Genbank的登陆号为918288，

所述枯草芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌QH10和枯草芽孢杆菌QH12，枯草芽孢杆菌QH10的16SrDNA在Genbank的登陆号为MN809144，枯草芽孢杆菌QH12的16SrDNA在Genbank的登陆号为MN809275。

8.根据权利要求7所述的一种微生物发酵菌剂，其特征在于，所述菌剂中，干酪乳杆菌QH16、哈伯氏乳杆菌QH21、屎肠球菌QH19、酿酒酵母QH1、酿酒酵母QH2、酿酒酵母QH8、枯草芽孢杆菌QH10和枯草芽孢杆菌QH12的活菌数比为1.0～2.5：1.0～2.5：2.0～3.0：2.0～2.5：3.0～3.5：3.0～3.5：1.5～2.0：2.0～2.5。

9.根据权利要求1～8任意一项所述微生物发酵菌剂的应用方法，其特征在于，用于果蔬发酵。

10.一种微生物发酵菌剂的制备方法，其特征在于，以葡萄酵素、哈密瓜酵素、桑葚酵素、猕猴桃酵素、酸奶和益生菌剂中的至少一种为原料，通过包括以下步骤的方法制得：

步骤S1，分别取各原料酵素置于MRS液体培养基中进行恒温培养，得到富集培养液；

步骤S2，对富集培养液进行分离纯化，采用梯度稀释法从培养液中分离得到纯菌种；

步骤S3，分别对各个分离得到的纯菌种进行耐酸性筛选和耐胆盐筛选，

所述耐酸性筛选具体为，将活化两代的纯菌种按1％的接种量分别接种于pH为3.5的MRS液体培养基、pH为6.5的MRS液体培养基、pH为3.5的YPD液体培养基、以及pH为6.5的YPD液体培养基中，在温度为35℃恒温摇床中培养24h后，测定其在600nm下的吸光值，将同类型培养基中两个吸光值的比值作为菌种在pH为3.5下的存活率，筛选出基于MRS液体培养基存活率大于50％的菌种，以及基于YPD液体培养基存活率大于80％的菌种；

所述耐胆盐筛选具体为，将活化两代后的纯菌种按1％的接种量分别接种于胆盐浓度为0.3％的MRS液体培养基、无胆盐的MRS液体培养基、胆盐浓度为0.3％的YPD液体培养基、以及无胆盐的的YPD液体培养基中，在温度为35℃恒温摇床中培养24h后，测定其在600nm下的吸光值，将同类型培养基中两个吸光值的比值作为菌种在0.3％胆盐浓度下的存活率，筛选出基于MRS液体培养基存活率大于20％的菌种，以及基于YPD液体培养基存活率大于45％的菌种；

步骤S4.将同时满足耐酸性筛选和耐胆盐筛选菌种进行复合，得到微生物发酵菌剂。