[发明专利]一种快速检测呼吸道合胞病毒的RDA方法及试剂盒

说明书

本发明公开一种快速检测呼吸道合胞病毒的RDA方法及试剂盒，包括特异性引物对以及RDA荧光标记探针，以实现对呼吸道合胞病毒（RSV）进行安全、特异、灵敏、简便的检测，从而弥补现有传统检测技术的不足。此方法提供的试剂盒可省去核酸提取步骤，并在37～42℃恒温条件下、20min内实现呼吸道合胞病毒的检测，特异性为100％，非常适用于现场快速检测。与普通PCR方法相比，RDA荧光法是在恒温下反应，不需变温，不需复杂仪器，而且反应时间短。因此，本发明的方法及其试剂盒具有操作简单、快速、特异性好、灵敏度高、成本低廉等特点，为呼吸道合胞病毒的现场快速检测筛查提供有效的技术手段，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域。更具体地，涉及一种基于RDA荧光法检测技术检测呼吸道合胞病毒核酸的引物对、探针及相关试剂盒。

背景技术

呼吸道合胞病毒（Respiratory Sycytial Virus，RSV）属于副粘病毒科肺病毒属，是一种具被膜的非节段单链RNA（负链）病毒。其基因组由大约15kb，编码10个基因，其中编码融合蛋白的F基因较为保守。RSV在细胞中可以引起细胞融合病变，根据这一特征命名为呼吸道合胞病毒，人是其唯一的天然宿主，主要感染人的鼻咽上皮细胞。它是引起婴幼儿下呼吸道感染最常见的病毒，主要通过呼吸道侵入人体，并通过空气（飞沫、尘埃等）传播，造成世界范围内婴幼儿下呼吸道病毒性感染最常见的原因之一。

儿童对RSV普遍易感，且再感染率很高。成人急性感染也很常见，老年人可引起严重肺炎，并发展为成人呼吸窘迫综合征（ARDS）。RSV感染症状主要包括咳嗽、鼻塞、流涕、咽喉不适等呼吸道局部症状和发热、乏力、头痛、肌肉酸痛等全身症状。RSV呈世界性分布，可根据抗原反应性分为A，B两个亚组，A亚组在全球多数地区处于优势流行。RSV感染潜伏期3～7天，有明显的季节性，主要暴发流行于冬春季节，每年的11月～次年2月为暴发流行的高峰季节。相比于其他常见呼吸道病毒，如流感病毒和副流感病毒，RSV更易引发下呼吸道感染，而急性下呼吸道感染是世界范围内导致儿童死亡的主要原因之一。

呼吸道合胞病毒感染的症状与流感病毒、普通细菌感染的症状相似性较高，患者往往会选择基层社区诊疗机构进行诊断。目前社区可以利用的基于抗原抗体的检测手段临床上存在一定的窗口期，利用核酸扩增手段检测RSV可以有效缩短窗口期，提高检测灵敏度。传统的核酸检测方法大多基于PCR，检测时需要依赖PCR仪或昂贵的实时定量PCR仪，需要多个操作过程，包括病毒的裂解，病毒RNA提取和分子检测，整个过程通常集中在实验室的内进行，需要精密的仪器和熟练的操作人员。然而这些条件在基层社区诊疗机构往往难以获得，严重阻碍了流感的快速诊断。目前仍然缺乏适合基层检验的简单便宜和自动化程度高的RSV检测试剂盒。

随着体外核酸恒温扩增的悄然兴起，传统扩增技术的局限性有所改变，在过去的十年中，使核酸体外扩增变得更加简单和方便的一些等温核酸扩增技术已得到快速发展，如LAMP（环介导核酸扩增技术）、HDA（解旋酶依赖等温核酸扩增技术）等均可在等温条件下扩增 DNA。这些技术只需要温度控制装置来保持一个恒定反应温度，就可以实现高效的核酸扩增，从而得以摆脱对精密控制温度变化的 PCR 仪的依赖。若能在常温条件下实现核酸的扩增，将进一步使核酸扩增技术简单化，并有利于此类技术更广范围的应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有呼吸道合胞病毒检测技术的缺陷和不足。研究得到一种呼吸道合胞病毒（RSV）RDA荧光法检测试剂盒，实现呼吸道合胞病毒的快速检测，在检测RSV的整个过程中，从样本处理到结果完成，仅需20-30min，大大缩短了常规的检测时间，提高检测效率。

本发明目的在于，提供优选后的检测呼吸道合胞病毒的探针及引物对。

所述探针核苷酸序列如SEQ ID NO .1或SEQ ID NO .2所示。