[发明专利]一种体外模拟细胞因子释放对间接靶细胞表型影响的方法

权利要求书

1.一种在体外模拟CRS对其它细胞影响的系统，具有上层隔室和下层隔室，上下层隔室之间通过微孔膜隔开，其特征再于上层隔室中A细胞B细胞共培养，在下层隔室中放入C细胞。

2.如权利要求1所述的系统，其特征在于：

A细胞选自靶向CD123 CD19，CD20，CD22，BCMA，MUC-1之一的CAR-T细胞。

3.如权利要求1或2所述的系统，其特征在于：B细胞为A细胞所对应靶细胞，为靶抗原阳性细胞或靶抗原阴性细胞，选自以下细胞或细胞系之一：白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、肝癌、肺癌、肾癌的细胞系及原代细胞，或人体正常组织原代细胞系及原代细胞。

4.如权利要求3所述的系统，其特征在于：B细胞为阳性对照组或实验组，选自人白血病细胞系MOLM-13、原代AML细胞、原代AML-2、原代AML-3。

5.如权利要求1所述的系统，其特征在于：C细胞选自在细胞因子释放综合症中参与或受影响的单核细胞，巨噬细胞，T细胞，B细胞，平滑肌细胞，基质细胞，肿瘤细胞。

6.如权利要求5所述的系统，其特征在于：C细胞为间接靶细胞，选自HUVEC，PBMCs，CD34+G-PBMCs。

7.如权利要求1所述的系统，其特征在于：微孔膜的孔径小于3μm。

8.使用如权利要求1-7之一模拟CRS对其它细胞影响的系统的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将A细胞与B细胞在上层隔室共孵育；

2)在下层隔室中加入需要研究的C细胞；

3)共孵育一定时间后，收集下层C细胞进行表型的检测，收集培养基进行细胞因子检测或冻存备用。

9.如权利要求7所述的使用方法，其特征在于：

A细胞为T细胞，通过采集人外周血获得并通过淋巴细胞分离液分离得到PBMCs，PBMCs通过CD3/CD28磁珠活化，并在X-VIVO-15+10％FBS，IL-250IU/ml条件下培养。

10.如权利要求7所述的使用方法，其特征在于：

A细胞选自靶向CD123 CD19，CD20，CD22，BCMA，MUC-1之一的CAR-T细胞。

11.如权利要求7所述的使用方法，其特征在于：B细胞为A细胞所对应靶细胞，为靶抗原阳性细胞或靶抗原阴性细胞，选自以下细胞或细胞系之一：白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、肝癌、肺癌、肾癌的细胞系及原代细胞，或人体正常组织原代细胞系及原代细胞。

12.如权利要求11所述的使用方法，其特征在于：B细胞为阳性对照组或实验组，选自人白血病细胞系MOLM-13、原代AML细胞、原代AML-2、原代AML-3。

13.如权利要求7所述的使用方法，其特征在于：C细胞选自在细胞因子释放综合症中参与或受影响的单核细胞，巨噬细胞，T细胞，B细胞，平滑肌细胞，基质细胞，肿瘤细胞。

14.如权利要求13所述的使用方法，其特征在于：C细胞为间接靶细胞，选自HUVEC，PBMCs，CD34+G-PBMCs。