[发明专利]快速检测苹果褐斑病菌的LAMP引物及其检测方法和试剂盒在审
| 申请号： | 202010075036.1 | 申请日： | 2020-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN111100947A | 公开（公告）日： | 2020-05-05 |
| 发明（设计）人： | 任维超;刘娜;李保华;练森;王彩霞 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 青岛鼎丞智佳知识产权代理事务所(普通合伙) 37277 | 代理人： | 韩耀朋 |
| 地址： | 266000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 快速 检测 苹果 褐斑 病菌 lamp 引物 及其 方法 试剂盒 | ||
1.快速检测苹果褐斑病菌的LAMP引物，其特征在于，由一对外引物F3和B3和一对内引物FIP和BIP组成，其中，正向外引物F3如SEQ ID No.1所示，反向外引物B3如SEQ ID No.2所示，正向内引物FIP如SEQ ID No.3所示，反向内引物BIP如SEQ ID No.4所示。
2.一种快速检测苹果褐斑病菌的LAMP检测方法，其特征在于，采用如权利要求1所述的LAMP引物进行LAMP扩增。
3.根据权利要求2所述的快速检测苹果褐斑病菌的LAMP检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用待测样品DNA模板，LAMP引物建立LAMP反应体系，进行LAMP扩增；
26μL的LAMP反应体系包括以下成分：
10μM的F3：0.5μL；
10μM的B3：0.5μL；
10μM的FIP：2μL；
10μM的BIP：2μL；
10×Thermo Pol Reaction Buffer：2.5μL；
100mM的MgSO4：4μL；
10mM的dNTPs：3.5μL；
5M的Betaine：4μL；
2.4mM的HNB：2μL；
8,000U/mL的Bst DNHA聚合酶：1μL；
DNA模板：2μL；
灭菌双蒸水补足至26μL；
(2)可直接通过肉眼观察反应管中反应产物显示为天蓝色，判断检测结果为阳性，或通过琼脂糖电泳观察梯形条带来判定检测结果为阳性；反应产物显示为紫色，或电泳图谱无条带，判断检测结果为阴性。
4.根据权利要求3所述的快速检测苹果褐斑病菌的LAMP检测方法，其特征在于，作为模板的待测样品DNA为提取的待测苹果褐斑病菌的基因组，或者用待测苹果褐斑病菌的ITS基因扩增产物。
5.根据权利要求3所述的检测苹果褐斑病菌的LAMP检测方法，其特征在于，LAMP扩增的反应条件为：首先，60℃，70min；接着，80℃，10min。
6.一种苹果褐斑病菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的LAMP引物。
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