[发明专利]一种皂角米酵素的制备方法

权利要求书

1.一种皂角米酵素的制备方法，其特征是，包括以下步骤：1)菌种活化与培养: 各菌株菌粉用蒸馏水混匀，30℃水浴活化1 h后， 在无菌条件下取适量菌液均匀涂布于固体培养基上，进行培养，继续重复上述培养步骤，继代培养2次后，获得用于发酵使用的菌种；

2)菌悬液的制备：将灭菌后的无菌水及锥形瓶放于洁净工作台上，开紫外杀菌 30min，当无菌水冷却至室温，再倒入少量无菌水于斜面培养皿中，用接种环轻轻将各活化的纯菌种分别洗脱于对应的250 mL广口锥形瓶中，将广口瓶放入温度为 25℃的水浴恒温振荡器中振荡30 min，用棉花挡住瓶口，分别过滤到另外的灭菌后的 250 mL广口锥形瓶中，将制得的菌悬液存放于4℃冷藏柜中；

3)原料预处理：将经过挑选的皂角米去除杂质，进行清洗后在温水中浸泡，至皂角米充分泡发后置于蒸锅中在100℃条件下蒸30 min， 冷却备用；

4)打浆：取步骤3)得到的预处理的皂角米，加纯水打浆，皂角米与水的质量比为1:4～5， 得到皂角米浆液；

5)酶解: 取步骤4)得到的浆液，加入α-淀粉酶进行酶解，α-淀粉酶的加入量为浆液质量的1%～2%，充分搅拌；酶解反应结束后测定皂角米酶解液的可溶性固形物含量、总酸度；

6)调糖: 调整步骤5)得到的浆液的糖度，加糖质量为浆液重量的2%；

7)灭菌: 对步骤6)得到的浆液进行高温高压灭菌；

8)一次发酵：将步骤7)得到的浆液加入酵母菌、植物乳杆菌发酵，发酵温度为28～37℃，发酵时间为24～48h；

9)二次发酵：将步骤5)得到的初始发酵液接入嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌和鼠李糖乳杆菌发酵，发酵温度40～45℃，糖度3～6g/L，总酸7～10g/L后终止发酵，迅速降温至18～25℃，静置24～48h；发酵结束后测定SOD活性；

10) 过滤：将步骤9)得到的发酵液用过滤机进行低温过滤，过滤温度保持在18～25℃；

11) 浓缩：将步骤10)得到的发酵液，采用真空低温浓缩设备进行浓缩，浓缩倍数2～4倍，得皂角米酵素；

12) 将步骤11)得到的皂角米酵素经过灭菌后包装，即为成品，低温储藏。

2.根据权利要求1所述的一种皂角米酵素的制备方法，其特征是，所述嗜热链球菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和酵母菌的质量比为(1.4～2.8)：(1.1～1.8)：(0.2～0.9)：(1.3～2)：(4.5～8)。

3.根据权利要求1所述的一种皂角米酵素的制备方法，其特征是，所述步骤1)中的培养基为BPA固体培养基，培养时间为48 h，培养温度为30℃。

4.根据权利要求1所述的一种皂角米酵素的制备方法，其特征是，所述步骤2)中制得的菌悬液浓度约为106 CFU/mL。

5.根据权利要求1所述的一种皂角米酵素的制备方法，其特征是，所述步骤3)中的泡发用水与皂角米的比例为5:1，泡发时间为2～3小时。

6.根据权利要求1所述的一种皂角米酵素的制备方法，其特征是，所述步骤4)中的酶解时间为90～120 min， 酶解温度为40～50℃。

7.根据权利要求1所述的一种皂角米酵素的制备方法，其特征是，所述步骤7)中的灭菌温度为110～120℃，灭菌时间为5～20 min。

8.根据权利要求1所述的一种皂角米酵素的制备方法，其特征是，所述步骤8)中的酵母菌的加入量是浆液质量的0.1～0.2％。

9.根据权利要求1所述的一种皂角米酵素的制备方法，其特征是，所述步骤9)中的SOD酶活力不低于286 U/g。

10.根据权利要求1所述的一种皂角米酵素的制备方法，其特征是，所述步骤11)中的低温真空浓缩是控制温度≤60℃，真空度为0.85～0.90 MPa。