[发明专利]一种改进的多抗霉素生物效价测定培养基及其制备方法

说明书

本发明涉及一种改进的多抗霉素生物效价测定培养基及其制备方法，由上层培养基和下层培养基组成，其中，上层培养基由以下配方组成：蔗糖0.5%‑3%，L‑天冬酰胺0.01%‑0.2%，磷酸二氢钾0.01%‑0.2%，蔬菜汁0.5%‑5%，琼脂10%‑20%，余量为纯水；下层培养基由以下配方组成：蔗糖0.5%‑3%，L‑天冬酰胺0.01%‑0.2%，磷酸二氢钾0.01%‑0.2%，琼脂10%‑20%，余量为纯水。与原有PDA培养基相比，其制备方法简单，培养基培养的指示菌菌落生长更加良好稳定且培养时间缩短，抑菌圈边缘更为清晰易于观察与测量，有效节省成本。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种改进的多抗霉素生物效价测定培养基及其制备方法。

背景技术

多抗霉素（Polyoxin）是金色链霉菌所产生的代谢产物，属于广谱性抗生素类杀菌剂。多抗霉素具有较好的内吸传导作用，其作用机理是干扰病菌细胞壁几丁质的生物合成，使菌体细胞壁不能进行生物合成从而导致病菌死亡，此外还具有抑制病菌产孢和病斑扩大的作用。多抗霉素因其组分不同而作用对象不同，主要是一类以a、b组份为主，主要用于防治苹果斑点落叶病，轮纹病，梨黑斑病，葡萄灰霉病，草莓、黄瓜、甜瓜的白粉病，霜霉病，人参黑斑病和烟草赤星病等十多种作物病害。另一类以d、e、f组份为主，主要用于水稻纹枯病的防治。多抗霉素是一种高效、低毒、无环境污染的安全生物农药，因此被广泛应用于粮食作物、特用作物、水果和蔬菜等重要病害的防治，在农药防治方面占有重要地位。

PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar(Medium)。PDA培养基是培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌最常用的培养基之一，也常用来培养各种植物病菌。其制备方法是将马铃薯洗净去皮，再称取200 g马铃薯切成小块，加水煮烂（煮沸20-30 min，能被玻璃棒戳破即可），用六到八层纱布过滤，加热，再据实际实验需要加15-20 g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入20 g葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000 mL，分装试管或者锥形瓶，加棉塞、包扎，115℃灭菌20-30 min后取出备用。

现有多抗霉素生物效价测定方法主要是管碟法中的二剂量法，其指示菌主要为烟草赤星病菌、斑点落叶病菌。管碟法是当前测定抗生素生物效价最常用的方法之一。管碟法抗生素效价测量实验包括配制试验所需的样品及药品、加注培养基、放置小钢管、滴加抗生素溶液、双碟中菌株的培养、抑菌圈测量六个步骤。其中培养基的质量严重影响着真菌的生长时长及抑菌圈的大小和清晰度。

当前多抗霉素生物效价测定指示菌主要为斑点落叶病菌和烟草赤星病菌，其培养基主要为PDA培养基。但是马铃薯的淀粉含量严重影响培养基的质量且PDA培养基灭菌后颜色较重，不利于抑菌圈的观察。此外，用PDA培养基培养斑点落叶病菌时培养时间较长，抑菌圈模糊，非常不利于观察。因此，对于多抗霉素，寻求一种稳定的能够有效改善多抗霉素抑菌圈培养时长及清晰度的生物效价测定培养基是非常有必要的。

发明内容

为解决现有技术测定多抗霉素生物效价时存在的上述问题，本发明提供一种改进的多抗霉素生物效价测定培养基及其制备方法，有效解决抑菌圈清晰度不高、边缘模糊、指示菌培养时间过长的问题。与PDA培养基相比，由于PDA培养基的营养成分主要来源于土豆，而本发明的培养基含有蔗糖、L-天冬酰胺、磷酸二氢钾及蔬菜汁，营养成分更加全面，比例控制更加得当，更适宜微生物生长。此外，本发明的培养基颜色较PDA培养基浅，培养出的指示菌菌落生长更加良好稳定、抑菌圈更加清晰、且培养时间缩短，有效节省经济成本。

本发明采用如下技术方案：一种改进的多抗霉素生物效价测定培养基，由上层培养基和下层培养基组成，其中，上层培养基由以下配方组成：蔗糖0.5%-3%，L-天冬酰胺0.01%-0.2%，磷酸二氢钾0.01%-0.2%，蔬菜汁0.5%-5%，琼脂10%-20%，余量为纯水；下层培养基由以下配方组成：蔗糖0.5%-3%，L-天冬酰胺0.01%-0.2%，磷酸二氢钾0.01%-0.2%，琼脂10%-20%，余量为纯水。