[发明专利]一种用于制备丹参酮类化合物的丹参P450突变体有效
| 申请号： | 202010041299.0 | 申请日： | 2020-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN113122512B | 公开（公告）日： | 2022-05-17 |
| 发明（设计）人： | 郭娟;毛亚平;马莹;曾雯;陈同;黄璐琦 | 申请（专利权）人： | 中国中医科学院中药研究所 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/81;C12N1/19;C12P15/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 秦梦楠 |
| 地址： | 100700 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 制备 丹参 酮类 化合物 p450 突变体 | ||
1.蛋白质，所述蛋白质为如下（a1）-（a6 ）中的任一种：
（a1）将序列表中序列4所示的蛋白质进行如下点突变得到的蛋白质：第301位氨基酸残基由E突变为D，第306位氨基酸残基由E突变为S；
（a2）将序列表中序列4所示的蛋白质进行如下点突变得到的蛋白质：第301位氨基酸残基由E突变为D，第479位氨基酸残基由F突变为V；
（a3）将序列表中序列4所示的蛋白质进行如下点突变得到的蛋白质：第301位氨基酸残基由E突变为D，第395位氨基酸残基由M突变为I；
（a4）将序列表中序列4所示的蛋白质进行如下点突变得到的蛋白质：第395位氨基酸残基由M突变为I；
（a5）将序列表中序列4所示的蛋白质进行如下点突变得到的蛋白质：第306位氨基酸残基由E突变为S，第395位氨基酸残基由M突变为I；
（a6）将序列表中序列4所示的蛋白质进行如下点突变得到的蛋白质：第301位氨基酸残基由E突变为D。
2.编码权利要求1所述的蛋白质的基因。
3.含有权利要求2所述基因的重组表达载体、表达盒或重组菌。
4.蛋白质或其编码基因在以次丹参酮二烯为底物催化生成铁锈醇中的应用；所述蛋白质为权利要求1中（a1）、（a2）、（a3）或（a6）所述的蛋白质。
5.蛋白质或其编码基因在以次丹参酮二烯为底物催化生成柳杉酚中的应用；所述蛋白质为权利要求1中（a1）、（a2）、（a3）、（a4）、（a5）或（a6）所述的蛋白质。
6.蛋白质或其编码基因在以次丹参酮二烯为底物催化生成11-羟基铁锈醇中的应用；所述蛋白质为权利要求1中（a4）或（a5）所述的蛋白质。
7.蛋白质或其编码基因在以次丹参酮二烯为底物催化生成11-羟基柳杉酚中的应用；所述蛋白质为权利要求1中（a3）、（a4）或（a5）所述的蛋白。
8.权利要求1所述的蛋白质的制备方法，包括如下步骤：培养权利要求3中所述的重组菌，从重组菌中得到所述蛋白质。
9.制备铁锈醇的方法，包括如下步骤：以次丹参酮二烯为底物，采用权利要求1中（a1）、（a2）、（a3）或（a6）所述的蛋白质进行催化反应，得到铁锈醇。
10.制备柳杉酚的方法，包括如下步骤：以次丹参酮二烯为底物，采用权利要求1中（a1）、（a2）、（a3）、（a4）、（a5）或（a6）所述的蛋白质进行催化反应，得到柳杉酚。
11.制备11-羟基铁锈醇的方法，包括如下步骤：以次丹参酮二烯为底物，采用权利要求1中（a4）或（a5）所述的蛋白质进行催化反应，得到11-羟基铁锈醇。
12.制备11-羟基柳杉酚的方法，包括如下步骤：以次丹参酮二烯为底物，采用权利要求1中（a3）、（a4）或（a5）所述的蛋白质进行催化反应，得到11-羟基柳杉酚。
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