[发明专利]一种快速检测绵羊LRRFIP1基因CNV标记的方法及其应用

权利要求书

1.一种检测绵羊LRRFIP1基因拷贝数变异的方法在绵羊分子标记辅助选择育种中的应用，其特征在于：检测绵羊LRRFIP1基因拷贝数变异的方法，包括以下步骤：

以绵羊基因组DNA为模板，以引物对P1和P2为引物，分别通过实时荧光定量PCR扩增LRRFIP1基因的拷贝数变异区域和作为内参的ANKRD1基因的部分片段，然后根据定量结果鉴定绵羊LRRFIP1基因的拷贝数变异类型；所述绵羊为茶卡羊；

所述的LRRFIP1基因的拷贝数变异区域位于绵羊LRRFIP1基因参考基因组序列NC_019458.2的3239601bp至3242400bp；

所述的拷贝数变异类型是根据2*2^-ΔCt将定量结果分为的三类：多拷贝型，2*2^-ΔCt 2；缺失型，2*2^-ΔCt 2；正常型，2*2^-∆Ct =2；

所述的引物对P1为：

上游引物F1：5’- CGCTGAGCTGTCCCAATACA -3’

下游引物R1：5’- GGGAAAGACTCCCTGTAAACACT-3’ ；

所述的引物对P2为：

上游引物F2：5’- TGGGCACCACGAAATTCTCA -3’

下游引物R2：5’-TGGCAGAAATGTGCGAACG -3’ ；

具有多拷贝型拷贝数变异类型的个体在胸围和体重上优于具有正常型和缺失型拷贝数变异类型的个体。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的实时荧光定量PCR的扩增体系包括：10ng/μL模板DNA 1 μL及10 pmol/L的引物对P1或引物对P2所对应的上、下游引物各0.5 μL。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的实时荧光定量PCR的反应程序为： 95℃预变性10 min； 95℃变性15 s，60℃退火1min，共40个循环。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于：基于引物对P1扩增的PCR产物片段大小为127bp，基于引物对P2扩增的PCR产物片段大小为143 bp。