[发明专利]用于特定隔室货物递送的组合物和方法

权利要求书

1.一种融合剂脂质体，其包括：

(a)包括来源于源细胞的多种脂质的脂质双层；

(b)被所述脂质双层包围的内腔；

(c)相对于所述源细胞为外源性的或过度表达的融合剂，其中将所述融合剂安置于所述脂质双层中；以及

(d)用于递送到靶细胞的细胞核的核有效负载剂。

2.根据权利要求1所述的融合剂脂质体，其中所述核有效负载剂包括或编码核定位信号(NLS)的蛋白质，所述核定位信号(NLS)与所述蛋白质的天然存在的对应物中的NLS相同。

3.根据权利要求1所述的融合剂脂质体，其中核蛋白有效负载剂包括或编码具有NLS的蛋白质，所述蛋白质的天然存在的对应物不包括所述NLS。

4.根据权利要求1到3中任一项所述的融合剂脂质体，其中所述核蛋白有效负载剂包括SEQ ID NO:128-507和605-626中的任一个中所示的核定位信号。

5.根据权利要求1到4中任一项所述的融合剂脂质体，其中：

i)当靶细胞与多个所述融合剂脂质体接触时，所述核蛋白有效负载剂或其中所编码的蛋白质以比所述靶细胞的细胞质中的所述核蛋白有效负载剂的水平高至少10％、20％、50％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍的水平存在于所述靶细胞的细胞核中；

ii)当靶细胞群体与多个所述融合剂脂质体接触时，所述核蛋白有效负载剂或其中所编码的蛋白质变得富集于所述靶细胞群体的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％的细胞的细胞核中；

iii)当靶细胞群体与多个所述融合剂脂质体接触时，所述核蛋白有效负载剂或其中所编码的蛋白质变得存在于所述靶细胞群体的作为接受者细胞群体的亚群中，其中所述核蛋白有效负载剂或其中所编码的蛋白质变得富集于所述接受者细胞群体的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％的细胞中的细胞核中；和/或

iv)至少1、2、5、10、20、50、100、200、500或1,000个拷贝的所述核蛋白有效负载剂或由核酸核蛋白有效负载剂编码的蛋白质存在于靶细胞中的细胞核中。

6.根据权利要求1到5中任一项所述的融合剂脂质体，其中所述核有效负载剂包括或编码以下中的一种或多种：转录活化子、转录阻遏子、表观遗传修饰剂、组蛋白乙酰基转移酶、组蛋白脱乙酰基酶、组蛋白甲基转移酶、DNA甲基转移酶、DNA切口酶、位点特异性DNA编辑酶，任选地脱氨酶、DNA转座酶、DNA整合酶、RNA编辑剂、RNA剪接因子或PIWI蛋白。

7.根据权利要求1到6中任一项所述的融合剂脂质体，其中所述核有效负载剂包括或编码：转录因子、核酸酶、重组酶、表观遗传因子、转录后RNA修饰因子、非编码RNA或核糖核酸蛋白或结构蛋白。

8.根据权利要求1到5中任一项所述的融合剂脂质体，其中所述核有效负载剂包括或编码抗体分子，例如Fab、scFv、scFab、sdAb、duobody、微型抗体、纳米抗体、双链抗体、zybody、骆驼科抗体、BiTE、四源杂交瘤或bsDb。

9.根据权利要求1到6中任一项所述的融合剂脂质体，其中所述核蛋白有效负载剂包括或编码融合蛋白，所述融合蛋白包括效应子域和定位域。

10.根据权利要求9所述的融合剂脂质体，其中所述定位域包括TAL域、锌指域、Cas9域或大范围核酸酶域。

11.根据权利要求9或权利要求10所述的融合剂脂质体，其中所述效应子域包括核酸酶、重组酶、整合酶、碱基编辑剂(脱氨酶)、转录因子或表观遗传修饰剂。

12.根据权利要求1到6中任一项所述的融合剂脂质体，其中所述核有效负载剂包括或编码基因编辑蛋白或核酸，任选地Cas9或向导RNA。