[发明专利]葡萄球菌属细菌的营养缺陷型菌株

说明书

本公开内容提供了依赖于D‑丙氨酸用于生长的重组葡萄球菌属细菌(例如表皮葡萄球菌)。在一个方面，本公开内容的特点在于重组葡萄球菌属细菌，其包含两个失活的丙氨酸消旋酶基因(Δalr1Δalr2)；以及失活的D‑丙氨酸转氨酶(dat)基因。在另一个方面，本公开内容的特点在于制备重组葡萄球菌属细菌的方法。在另一个方面，本公开内容的特点在于治疗或预防受试者的皮疹的方法，其包括以有效治疗或预防受试者的皮疹的量给予所述受试者本文所述的方面或实施方案中任何一个的重组葡萄球菌属细菌的群体。

优先权要求

本申请要求2018年11月16日提交的美国临时申请系列号62/768,485的权益，其整个内容通过引用以其整体结合到本文中用于所有目的。

发明背景

丙氨酸消旋酶是一种催化l-丙氨酸至d-丙氨酸的转换的含磷酸吡哆醛的同源二聚体酶，d-丙氨酸是细菌细胞壁中的肽聚糖层生物合成的关键构件块。丙氨酸消旋酶通常在真核生物中不存在，但在原核生物中普遍存在，这使得该酶成为用于开发新型抗微生物剂的有吸引力的靶标。

尽管D-丙氨酸对于细菌细胞壁形成是必需的，但已经证明确定在D-丙氨酸生物合成途径中哪些基因是关键的是更加复杂的。细菌包含一个或两个丙氨酸消旋酶基因。在具有两个基因的物种中，一个是组成性表达和合成代谢的，而另一个是可诱导和分解代谢的(Strych，U.等人2007. BMC Microbiol. 7:40；Strych U.等人，Curr. Microbiol. 41:290-294；Strych U.等人，FEMS Microbiol. Lett. 196:93-98)。这些基因供应了对于细胞壁生物合成所需的D-丙氨酸，并且用这些细菌中的几种的敲除研究已确立，丙氨酸消旋酶对于在不存在外源D-丙氨酸的情况下的生长是必需的(Franklin，F. C.和W. A.Venables. 1976. Mol. Gen. Genet. 149:229-237；Hols，P.等人J. Bacteriol. 179:3804-3807；Palumbo，E.等人FEMS Microbiol. Lett. 233:131-138；Steen，A.等人J.Bacteriol. 187:114-124；Wijsman，H. J. 1972. Genet. Res. 20:269-277)。

之前开发了双重丙氨酸消旋酶基因敲除表皮葡萄球菌(S. epidemidis)菌株(SEΔalr1Δalr2)。然而，与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)和一些其它细菌物种相反，所述双重敲除菌株未显示出D-丙氨酸营养缺陷型。

本公开内容因此解决了对于依赖于D-丙氨酸用于生长的葡萄球菌属(Staphylococcus)细菌的需要。

发明简述

本公开内容涉及依赖于D-丙氨酸用于生长的重组葡萄球菌属细菌。

在一个方面，本公开内容的特点在于重组葡萄球菌属细菌，其包含两个失活的丙氨酸消旋酶基因(Δalr1Δalr2)；以及失活的D-丙氨酸转氨酶(dat)基因。在一个实施方案中，葡萄球菌属细菌依赖于D-丙氨酸用于生长。在另一个实施方案中，葡萄球菌属细菌是表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)(表皮葡萄球菌(S. Epidermidis))及其亚种。在一个实施方案中，葡萄球菌属细菌进一步包含一种或多种另外的突变。